中国耳鼻咽喉头颈外科
中國耳鼻嚥喉頭頸外科
중국이비인후두경외과
CHINESE ARCHIVER OF OTOLARYNGOLOGY-HEAD AND NECK SURGERY
2013年
5期
235-238
,共4页
RNA,小分子干扰%肿瘤,鳞状细胞%酸性神经酰胺酶
RNA,小分子榦擾%腫瘤,鱗狀細胞%痠性神經酰胺酶
RNA,소분자간우%종류,린상세포%산성신경선알매
RNA,Small Interfering%Neoplasms Squamous Cell%acid ceramidase
目的 构建特异性抑制人酸性神经酰胺酶(acid ceramidase,AC)基因表达的短发夹RNA (shorthairpin RNA,shRNA)载体,筛选出基因沉默效果最明显的shRNA,以明了shRNA对头颈肿瘤细胞AC表达的影响.方法 针对人AC基因设计并构建4个shRNA质粒,转染人肾上皮细胞系293T细胞,通过实时定量PCR及Western blot的方法筛选出沉默效果最明显的shRNA序列,以该序列构建慢病毒载体感染人鼻咽癌CNE-2Z细胞及人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞,验证其对这些细胞的基因沉默效果.结果 4个shRNA质粒转染293T细胞后AC mRNA及蛋白表达均降低,其中sh1340的抑制效果最明显.sh1340慢病毒感染肿瘤细胞后AC基因沉默的效果分别为CNE-2Z (79.3±0.5)％和Hep-2(80.7±5.1)％.结论 成功构建特异性抑制AC表达的shRNA表达载体,为进一步研究AC的功能及头颈肿瘤的基因治疗奠定基础.
目的 構建特異性抑製人痠性神經酰胺酶(acid ceramidase,AC)基因錶達的短髮夾RNA (shorthairpin RNA,shRNA)載體,篩選齣基因沉默效果最明顯的shRNA,以明瞭shRNA對頭頸腫瘤細胞AC錶達的影響.方法 針對人AC基因設計併構建4箇shRNA質粒,轉染人腎上皮細胞繫293T細胞,通過實時定量PCR及Western blot的方法篩選齣沉默效果最明顯的shRNA序列,以該序列構建慢病毒載體感染人鼻嚥癌CNE-2Z細胞及人喉鱗狀細胞癌Hep-2細胞,驗證其對這些細胞的基因沉默效果.結果 4箇shRNA質粒轉染293T細胞後AC mRNA及蛋白錶達均降低,其中sh1340的抑製效果最明顯.sh1340慢病毒感染腫瘤細胞後AC基因沉默的效果分彆為CNE-2Z (79.3±0.5)％和Hep-2(80.7±5.1)％.結論 成功構建特異性抑製AC錶達的shRNA錶達載體,為進一步研究AC的功能及頭頸腫瘤的基因治療奠定基礎.
목적 구건특이성억제인산성신경선알매(acid ceramidase,AC)기인표체적단발협RNA (shorthairpin RNA,shRNA)재체,사선출기인침묵효과최명현적shRNA,이명료shRNA대두경종류세포AC표체적영향.방법 침대인AC기인설계병구건4개shRNA질립,전염인신상피세포계293T세포,통과실시정량PCR급Western blot적방법사선출침묵효과최명현적shRNA서렬,이해서렬구건만병독재체감염인비인암CNE-2Z세포급인후린상세포암Hep-2세포,험증기대저사세포적기인침묵효과.결과 4개shRNA질립전염293T세포후AC mRNA급단백표체균강저,기중sh1340적억제효과최명현.sh1340만병독감염종류세포후AC기인침묵적효과분별위CNE-2Z (79.3±0.5)％화Hep-2(80.7±5.1)％.결론 성공구건특이성억제AC표체적shRNA표체재체,위진일보연구AC적공능급두경종류적기인치료전정기출.
