中国耳鼻咽喉头颈外科
中國耳鼻嚥喉頭頸外科
중국이비인후두경외과
CHINESE ARCHIVER OF OTOLARYNGOLOGY-HEAD AND NECK SURGERY
2013年
11期
583-586
,共4页
邓文婷%王双乐%温国封%李创伟
鄧文婷%王雙樂%溫國封%李創偉
산문정%왕쌍악%온국봉%리창위
凋亡调节蛋白质类%细胞,培养的%RNA干扰%Livin基因
凋亡調節蛋白質類%細胞,培養的%RNA榦擾%Livin基因
조망조절단백질류%세포,배양적%RNA간우%Livin기인
Apoptosis Regulatory Proteins%Cells,Cultured%RNA Interference%Livin gene
目的 构建靶向Livin基因干扰真核表达质粒,建立干扰质粒稳定转染的Hep-2细胞系,下调Livin基因在Hep-2细胞系中的表达.方法 针对Livin基因的mRNA序列设计干扰序列,分别构建1个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒,大肠杆菌扩增、酶切及测序鉴定,用脂质体介导转染Hep-2细胞,经G418筛选出稳定转染的细胞系,用Real-time PCR和Western blot检测Livin在mRNA和蛋白水平的抑制效果.结果 经测序证实成功构建pGenesil-Livin shRNA真核表达质粒.干扰质粒稳定转染的Hep-2细胞在荧光显微镜下观察,发出绿色荧光.重组质粒转染Hep-2细胞后,Livin基因在mRNA及蛋白水平明显下降,mRNA水平下调47.17％,蛋白水平下调34.25％.结论 成功构建以Livin为靶向的Livin shRNA真核表达质粒.对喉癌Hep-2细胞中Livin的表达具有显著抑制效应,为研究Livin在Hep-2中的功能和喉癌的基因治疗奠定了基础.
目的 構建靶嚮Livin基因榦擾真覈錶達質粒,建立榦擾質粒穩定轉染的Hep-2細胞繫,下調Livin基因在Hep-2細胞繫中的錶達.方法 針對Livin基因的mRNA序列設計榦擾序列,分彆構建1箇shRNA質粒錶達載體和1箇陰性對照質粒,大腸桿菌擴增、酶切及測序鑒定,用脂質體介導轉染Hep-2細胞,經G418篩選齣穩定轉染的細胞繫,用Real-time PCR和Western blot檢測Livin在mRNA和蛋白水平的抑製效果.結果 經測序證實成功構建pGenesil-Livin shRNA真覈錶達質粒.榦擾質粒穩定轉染的Hep-2細胞在熒光顯微鏡下觀察,髮齣綠色熒光.重組質粒轉染Hep-2細胞後,Livin基因在mRNA及蛋白水平明顯下降,mRNA水平下調47.17％,蛋白水平下調34.25％.結論 成功構建以Livin為靶嚮的Livin shRNA真覈錶達質粒.對喉癌Hep-2細胞中Livin的錶達具有顯著抑製效應,為研究Livin在Hep-2中的功能和喉癌的基因治療奠定瞭基礎.
목적 구건파향Livin기인간우진핵표체질립,건립간우질립은정전염적Hep-2세포계,하조Livin기인재Hep-2세포계중적표체.방법 침대Livin기인적mRNA서렬설계간우서렬,분별구건1개shRNA질립표체재체화1개음성대조질립,대장간균확증、매절급측서감정,용지질체개도전염Hep-2세포,경G418사선출은정전염적세포계,용Real-time PCR화Western blot검측Livin재mRNA화단백수평적억제효과.결과 경측서증실성공구건pGenesil-Livin shRNA진핵표체질립.간우질립은정전염적Hep-2세포재형광현미경하관찰,발출록색형광.중조질립전염Hep-2세포후,Livin기인재mRNA급단백수평명현하강,mRNA수평하조47.17％,단백수평하조34.25％.결론 성공구건이Livin위파향적Livin shRNA진핵표체질립.대후암Hep-2세포중Livin적표체구유현저억제효응,위연구Livin재Hep-2중적공능화후암적기인치료전정료기출.
