中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2015年
5期
387-391
,共5页
刘畅%路义鑫%杨朋欣%李晓云%王泽%汪洋%宋铭忻
劉暢%路義鑫%楊朋訢%李曉雲%王澤%汪洋%宋銘忻
류창%로의흠%양붕흔%리효운%왕택%왕양%송명흔
液相基因芯片%猪囊尾蚴%华支睾吸虫
液相基因芯片%豬囊尾蚴%華支睪吸蟲
액상기인심편%저낭미유%화지고흡충
liquid gene chip%Cysticercus cellulose%Clonorchis sinensis
为建立一种可以同时检测猪囊尾蚴和华支睾吸虫的液相基因芯片方法,本研究以猪囊尾蚴ITS基因和华支睾吸虫ITS基因为靶序列,设计并合成特异性探针和引物,通过PCR方法扩增目的片段,构建阳性重组质粒标准品并对其进行测序,建立一种基于双重PCR的液相基因芯片检测方法.结果显示,扩增目的片段长度分别约为150 bp和170 bp,测序结果与GenBank登录的猪囊尾蚴和华支睾吸虫相关基因一致性分别为99.35％和98.27％;液相基因芯片对单重PCR产物和双重PCR产物的检测结果一致,特异性和重复性良好.应用该方法检测猪囊尾蚴和华支睾吸虫的灵敏度分别为5.13×104拷贝/μL和2.03×104拷贝/μL,比琼脂糖凝胶电泳灵敏高约8倍;应用该方法检测猪囊尾蚴和华支睾吸虫的变异系数均在8％以内,模拟污染样品的检验试验准确率达98％.本研究初步建立了可以同时高效、灵敏和特异检测猪囊尾蚴和华支睾吸虫的液相基因芯片方法,为人畜共患寄生虫的检测和监控提供了新方法.
為建立一種可以同時檢測豬囊尾蚴和華支睪吸蟲的液相基因芯片方法,本研究以豬囊尾蚴ITS基因和華支睪吸蟲ITS基因為靶序列,設計併閤成特異性探針和引物,通過PCR方法擴增目的片段,構建暘性重組質粒標準品併對其進行測序,建立一種基于雙重PCR的液相基因芯片檢測方法.結果顯示,擴增目的片段長度分彆約為150 bp和170 bp,測序結果與GenBank登錄的豬囊尾蚴和華支睪吸蟲相關基因一緻性分彆為99.35％和98.27％;液相基因芯片對單重PCR產物和雙重PCR產物的檢測結果一緻,特異性和重複性良好.應用該方法檢測豬囊尾蚴和華支睪吸蟲的靈敏度分彆為5.13×104拷貝/μL和2.03×104拷貝/μL,比瓊脂糖凝膠電泳靈敏高約8倍;應用該方法檢測豬囊尾蚴和華支睪吸蟲的變異繫數均在8％以內,模擬汙染樣品的檢驗試驗準確率達98％.本研究初步建立瞭可以同時高效、靈敏和特異檢測豬囊尾蚴和華支睪吸蟲的液相基因芯片方法,為人畜共患寄生蟲的檢測和鑑控提供瞭新方法.
위건립일충가이동시검측저낭미유화화지고흡충적액상기인심편방법,본연구이저낭미유ITS기인화화지고흡충ITS기인위파서렬,설계병합성특이성탐침화인물,통과PCR방법확증목적편단,구건양성중조질립표준품병대기진행측서,건립일충기우쌍중PCR적액상기인심편검측방법.결과현시,확증목적편단장도분별약위150 bp화170 bp,측서결과여GenBank등록적저낭미유화화지고흡충상관기인일치성분별위99.35％화98.27％;액상기인심편대단중PCR산물화쌍중PCR산물적검측결과일치,특이성화중복성량호.응용해방법검측저낭미유화화지고흡충적령민도분별위5.13×104고패/μL화2.03×104고패/μL,비경지당응효전영령민고약8배;응용해방법검측저낭미유화화지고흡충적변이계수균재8％이내,모의오염양품적검험시험준학솔체98％.본연구초보건립료가이동시고효、령민화특이검측저낭미유화화지고흡충적액상기인심편방법,위인축공환기생충적검측화감공제공료신방법.
