中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2015年
5期
339-343
,共5页
王玉龙%李慧昕%李冰%胡永浩%刘胜旺
王玉龍%李慧昕%李冰%鬍永浩%劉勝旺
왕옥룡%리혜흔%리빙%호영호%류성왕
鸭肠炎病毒%TK基因%重组病毒%病毒复制
鴨腸炎病毒%TK基因%重組病毒%病毒複製
압장염병독%TK기인%중조병독%병독복제
duck enteritis virus%TK gene%recombinant virus%virus replication
为鉴定鸭肠炎病毒(DEV)的非必需基因,本研究利用增强型绿色蛋白(EGFP)基因为报告基因,通过在转染的鸡胚成纤维细胞(CEF)中同源重组,将其插入DEV基因组的TK基因中,经筛选和纯化绿色荧光病毒蚀斑,获得表达EGFP的重组DEV,命名为rDEVTK-EGFP.对重组病毒与亲本病毒DEV Clone-03复制动力学比较结果显示,重组病毒滴度显著低于亲本病毒(p＜0.01).对重组病毒在复制过程中感染细胞能力和荧光表达时相检测结果表明,在感染后48 h～72 h表达荧光信号细胞明显增多,该结果与重组病毒复制动力学一致.将重组病毒在CEF中连续传代至20代,仍具有遗传稳定性.该研究结果表明,TK基因为DEV复制非必需基因,可以作为外源基因插入位点,用于禽用新型基因工程疫苗的研制.
為鑒定鴨腸炎病毒(DEV)的非必需基因,本研究利用增彊型綠色蛋白(EGFP)基因為報告基因,通過在轉染的鷄胚成纖維細胞(CEF)中同源重組,將其插入DEV基因組的TK基因中,經篩選和純化綠色熒光病毒蝕斑,穫得錶達EGFP的重組DEV,命名為rDEVTK-EGFP.對重組病毒與親本病毒DEV Clone-03複製動力學比較結果顯示,重組病毒滴度顯著低于親本病毒(p＜0.01).對重組病毒在複製過程中感染細胞能力和熒光錶達時相檢測結果錶明,在感染後48 h～72 h錶達熒光信號細胞明顯增多,該結果與重組病毒複製動力學一緻.將重組病毒在CEF中連續傳代至20代,仍具有遺傳穩定性.該研究結果錶明,TK基因為DEV複製非必需基因,可以作為外源基因插入位點,用于禽用新型基因工程疫苗的研製.
위감정압장염병독(DEV)적비필수기인,본연구이용증강형록색단백(EGFP)기인위보고기인,통과재전염적계배성섬유세포(CEF)중동원중조,장기삽입DEV기인조적TK기인중,경사선화순화록색형광병독식반,획득표체EGFP적중조DEV,명명위rDEVTK-EGFP.대중조병독여친본병독DEV Clone-03복제동역학비교결과현시,중조병독적도현저저우친본병독(p＜0.01).대중조병독재복제과정중감염세포능력화형광표체시상검측결과표명,재감염후48 h～72 h표체형광신호세포명현증다,해결과여중조병독복제동역학일치.장중조병독재CEF중련속전대지20대,잉구유유전은정성.해연구결과표명,TK기인위DEV복제비필수기인,가이작위외원기인삽입위점,용우금용신형기인공정역묘적연제.
