CAJ | 학술논문

为优化人脐静脉内皮细胞(HUVEC)原代及传代的培养方法,建立一种简便且能够获得数量较多及活力良好的HUVEC培养体系.分离脐静脉并插管,用0.1％的Ⅱ型胶原酶灌注消化分离内皮细胞.M199完全培养基悬浮并接种于细胞培养瓶,37℃,5％CO2培养.待细胞铺满80％时,0.25％胰酶-EDTA消化传代培养.倒置显微镜观察内皮细胞生长情况,姬姆萨染色法鉴定内皮细胞的形态,vWF因子相关抗原免疫荧光法鉴定内皮细胞.比较不同胶原酶消化时间、不同接种密度、不同胰酶消化时间、不同培养基组分对细胞得率、形态和纯度的影响.结果表明,原代培养时,Ⅱ型胶原酶最佳消化时间为15 min,最佳接神密度为1×106 mL-1;传代培养时,胰酶最佳消化时间为2min.倒置显微镜下观察和姬姆萨染色结果显示,贴壁内皮细胞呈长梭形,且呈单层铺路石状排列.免疫荧光检测结果表明,细胞胞浆呈绿色荧光,为vWF因子阳性细胞,DAPI衬染细胞核呈蓝色,显示内皮细胞纯度接近100％.本实验成功建立了HUVEC原代分离培养的优化体系,纯度高、活力好,为后续研究做好了准备.
위우화인제정맥내피세포(HUVEC)원대급전대적배양방법,건립일충간편차능구획득수량교다급활력량호적HUVEC배양체계.분리제정맥병삽관,용0.1％적Ⅱ형효원매관주소화분리내피세포.M199완전배양기현부병접충우세포배양병,37℃,5％CO2배양.대세포포만80％시,0.25％이매-EDTA소화전대배양.도치현미경관찰내피세포생장정황,희모살염색법감정내피세포적형태,vWF인자상관항원면역형광법감정내피세포.비교불동효원매소화시간、불동접충밀도、불동이매소화시간、불동배양기조분대세포득솔、형태화순도적영향.결과표명,원대배양시,Ⅱ형효원매최가소화시간위15 min,최가접신밀도위1×106 mL-1;전대배양시,이매최가소화시간위2min.도치현미경하관찰화희모살염색결과현시,첩벽내피세포정장사형,차정단층포로석상배렬.면역형광검측결과표명,세포포장정록색형광,위vWF인자양성세포,DAPI츤염세포핵정람색,현시내피세포순도접근100％.본실험성공건립료HUVEC원대분리배양적우화체계,순도고、활력호,위후속연구주호료준비.