CAJ | 학술논문

目的:探究大鼠外周血间充质干细胞(PBMSC)的有效富集方法,并进一步研究其生物学特性.方法:采集经G-CSF动员的4周龄SD大鼠外周血,用密度梯度离心法分离出单个核细胞,继而采用贴壁培养法获得成纤维样集落生长细胞,绘制细胞生长曲线;应用流式细胞术(CD90、CD44、CD29、CD45、CD11b和CD79a)和免疫细胞化学染色法(CD73、CD105、CD34和HLA-DR)分析富集的第2代PBMSC的表型特征,并对其进行成骨、成软骨和成脂肪细胞诱导分化能力鉴定.结果:①原代培养6-7d可见明显的成纤维样细胞集落生长,至培养21 d细胞生长汇合度可达80％;传代细胞贴壁能力强,形态均一,呈梭形漩涡状生长;传代培养的PBMSC于培养次日即可进入对数生长期,细胞倍增时间为39.2 h.②富集的PBMSC高表达CD90、CD44、CD29、CD73及CD105,不表达CD45、CD11b、CD79a、CD34和HLA-DR.③PBMSC分别经成骨、成软骨和成脂细胞诱导分化培养21 d后,再分别经茜素红染色显示有大量钙化结节形成,阿利新蓝染色的胞浆内有大量糖胺聚糖形成,油红O染色细胞内有大量脂滴形成.结论:采用本研究方法可从大鼠外周血中分离富集到高纯度、高丰度的PBMSC,且其具备MSC的生长特点和表型特征,并具有中胚层多系分化能力.
목적:탐구대서외주혈간충질간세포(PBMSC)적유효부집방법,병진일보연구기생물학특성.방법:채집경G-CSF동원적4주령SD대서외주혈,용밀도제도리심법분리출단개핵세포,계이채용첩벽배양법획득성섬유양집락생장세포,회제세포생장곡선;응용류식세포술(CD90、CD44、CD29、CD45、CD11b화CD79a)화면역세포화학염색법(CD73、CD105、CD34화HLA-DR)분석부집적제2대PBMSC적표형특정,병대기진행성골、성연골화성지방세포유도분화능력감정.결과:①원대배양6-7d가견명현적성섬유양세포집락생장,지배양21 d세포생장회합도가체80％;전대세포첩벽능력강,형태균일,정사형선와상생장;전대배양적PBMSC우배양차일즉가진입대수생장기,세포배증시간위39.2 h.②부집적PBMSC고표체CD90、CD44、CD29、CD73급CD105,불표체CD45、CD11b、CD79a、CD34화HLA-DR.③PBMSC분별경성골、성연골화성지세포유도분화배양21 d후,재분별경천소홍염색현시유대량개화결절형성,아리신람염색적포장내유대량당알취당형성,유홍O염색세포내유대량지적형성.결론:채용본연구방법가종대서외주혈중분리부집도고순도、고봉도적PBMSC,차기구비MSC적생장특점화표형특정,병구유중배층다계분화능력.