CAJ | 학술논문

目的:兔是再生医学领域应用最为广泛的实验动物之一,但目前大规模培养兔间充质干细胞却面临着收获细胞数量少和纯净度低等难题.本研究旨在建立一种培养骨髓栓而获得大量的具有更高增殖活性和自我更新能力的间充质干细胞的方法.方法:骨髓栓法采用被胶原酶消化过的骨髓栓进行培养,骨髓细胞法用骨髓细胞直接贴壁培养以获得间充质干细胞;在光学显微镜下观察两种细胞的形态;以流式细胞术检测两种间充质干细胞的免疫表型;对获得的两种间充质干细胞进行成骨和成脂肪诱导分化,并观察其分化能力;采用CCK-8法检测两种细胞的增殖能力;以成纤维细胞集落单位形成实验检测其自我更新能力;分别对第1,2,3,4代收获的间充质干细胞进行计数,比较两种方法收获的细胞数量.结果:两种间充质干细胞的形态均为成纤维细胞样;流式细胞术表型分析发现,骨髓栓来源的间充质干细胞中CD45阳性造血细胞比例显著降低(P＜0.05);多向诱导分化实验结果显示,骨髓栓来源的间充质干细胞具有良好的成骨和成脂肪分化能力;CCK-8实验和成纤维细胞集落单位形成实验结果显示,骨髓栓来源的间充质干细胞具有更强的增殖活性和集落形成能力(P＜0.05);细胞计数显示,骨髓栓法获得的间充质干细胞数量显著多于骨髓细胞法(P＜0.05).结论:骨髓栓培养法获得的间充质干细胞纯净度和数量均优于以往的方法,相关发现将为开展再生医学研究提供帮助.
목적:토시재생의학영역응용최위엄범적실험동물지일,단목전대규모배양토간충질간세포각면림착수획세포수량소화순정도저등난제.본연구지재건립일충배양골수전이획득대량적구유경고증식활성화자아경신능력적간충질간세포적방법.방법:골수전법채용피효원매소화과적골수전진행배양,골수세포법용골수세포직접첩벽배양이획득간충질간세포;재광학현미경하관찰량충세포적형태;이류식세포술검측량충간충질간세포적면역표형;대획득적량충간충질간세포진행성골화성지방유도분화,병관찰기분화능력;채용CCK-8법검측량충세포적증식능력;이성섬유세포집락단위형성실험검측기자아경신능력;분별대제1,2,3,4대수획적간충질간세포진행계수,비교량충방법수획적세포수량.결과:량충간충질간세포적형태균위성섬유세포양;류식세포술표형분석발현,골수전래원적간충질간세포중CD45양성조혈세포비례현저강저(P＜0.05);다향유도분화실험결과현시,골수전래원적간충질간세포구유량호적성골화성지방분화능력;CCK-8실험화성섬유세포집락단위형성실험결과현시,골수전래원적간충질간세포구유경강적증식활성화집락형성능력(P＜0.05);세포계수현시,골수전법획득적간충질간세포수량현저다우골수세포법(P＜0.05).결론:골수전배양법획득적간충질간세포순정도화수량균우우이왕적방법,상관발현장위개전재생의학연구제공방조.