中国畜牧杂志
中國畜牧雜誌
중국축목잡지
CHINESE JOURNAL OF ANIMAL SCIENCE
2015年
9期
62-67
,共6页
罗婵%任艳萍%屈春凤%李海洋%李湘萍%石德顺
囉嬋%任豔萍%屈春鳳%李海洋%李湘萍%石德順
라선%임염평%굴춘봉%리해양%리상평%석덕순
启动子%PolyA序列%促乳素%绿色荧光蛋白%基因表达%水牛
啟動子%PolyA序列%促乳素%綠色熒光蛋白%基因錶達%水牛
계동자%PolyA서렬%촉유소%록색형광단백%기인표체%수우
promoter%polyA sequence%prolactin%green fluorescent protein%gene expression%buffalo
为了获得能有效表达促乳素的乳腺特异性表达载体,本研究系统比较了不同长度的启动子和有/无PolyA序列对乳腺特异性表达载体表达标记基因绿色荧光蛋白(GFP)和目的基因促乳素(PRL)的影响.将不同载体瞬时转染Bcap37细胞后,分别用实时定量PCR和流式细胞仪检测PRL和GFP的表达水平.结果表明:长度为5.2 kb的β-酪蛋白(Beta casein,BCN)启动子启动PRL的表达量显著高于长度为3.8 kb启动子,前者的表达量约为后者的6倍;在BCN启动子长度均为5.2 kb情况下,添加PolyA的载体p5.2BCN-PRL-PolyA-CMV-GFP-Neo组PRL的相对表达量为8.17,p5.2BCN-PRL-PolyA-CMV-GFP组PRL的相对表达量为17.84,均显著高于p5.2BCN-PRL-CMV-GFP-Neo组,可见添加PolyA后,PRL的表达量均显著增加;进一步比较发现,含PolyA的载体中GFP的表达水平也显著高于不合PolyA的载体.对比以上结果发现,添加PolyA能够有效解除启动子之间的转录干扰,使标记基因的启动子CMV和目的基因的启动子BCN均能顺利启动基因表达.经过优化的载体启动目的基因PRL表达的效率更高,可应用于下一步的研究工作中.
為瞭穫得能有效錶達促乳素的乳腺特異性錶達載體,本研究繫統比較瞭不同長度的啟動子和有/無PolyA序列對乳腺特異性錶達載體錶達標記基因綠色熒光蛋白(GFP)和目的基因促乳素(PRL)的影響.將不同載體瞬時轉染Bcap37細胞後,分彆用實時定量PCR和流式細胞儀檢測PRL和GFP的錶達水平.結果錶明:長度為5.2 kb的β-酪蛋白(Beta casein,BCN)啟動子啟動PRL的錶達量顯著高于長度為3.8 kb啟動子,前者的錶達量約為後者的6倍;在BCN啟動子長度均為5.2 kb情況下,添加PolyA的載體p5.2BCN-PRL-PolyA-CMV-GFP-Neo組PRL的相對錶達量為8.17,p5.2BCN-PRL-PolyA-CMV-GFP組PRL的相對錶達量為17.84,均顯著高于p5.2BCN-PRL-CMV-GFP-Neo組,可見添加PolyA後,PRL的錶達量均顯著增加;進一步比較髮現,含PolyA的載體中GFP的錶達水平也顯著高于不閤PolyA的載體.對比以上結果髮現,添加PolyA能夠有效解除啟動子之間的轉錄榦擾,使標記基因的啟動子CMV和目的基因的啟動子BCN均能順利啟動基因錶達.經過優化的載體啟動目的基因PRL錶達的效率更高,可應用于下一步的研究工作中.
위료획득능유효표체촉유소적유선특이성표체재체,본연구계통비교료불동장도적계동자화유/무PolyA서렬대유선특이성표체재체표체표기기인록색형광단백(GFP)화목적기인촉유소(PRL)적영향.장불동재체순시전염Bcap37세포후,분별용실시정량PCR화류식세포의검측PRL화GFP적표체수평.결과표명:장도위5.2 kb적β-락단백(Beta casein,BCN)계동자계동PRL적표체량현저고우장도위3.8 kb계동자,전자적표체량약위후자적6배;재BCN계동자장도균위5.2 kb정황하,첨가PolyA적재체p5.2BCN-PRL-PolyA-CMV-GFP-Neo조PRL적상대표체량위8.17,p5.2BCN-PRL-PolyA-CMV-GFP조PRL적상대표체량위17.84,균현저고우p5.2BCN-PRL-CMV-GFP-Neo조,가견첨가PolyA후,PRL적표체량균현저증가;진일보비교발현,함PolyA적재체중GFP적표체수평야현저고우불합PolyA적재체.대비이상결과발현,첨가PolyA능구유효해제계동자지간적전록간우,사표기기인적계동자CMV화목적기인적계동자BCN균능순리계동기인표체.경과우화적재체계동목적기인PRL표체적효솔경고,가응용우하일보적연구공작중.
