中国畜牧杂志
中國畜牧雜誌
중국축목잡지
CHINESE JOURNAL OF ANIMAL SCIENCE
2015年
9期
56-61
,共6页
赵旺生%罗军%邱思源%王紫骞
趙旺生%囉軍%邱思源%王紫鶱
조왕생%라군%구사원%왕자건
催乳素受体%克隆%腺病毒%shRNA%奶山羊
催乳素受體%剋隆%腺病毒%shRNA%奶山羊
최유소수체%극륭%선병독%shRNA%내산양
dairy goat%PrlR%cloning%adenovirus%shRNA
本文旨在克隆奶山羊催乳素受体(PrlR)基因CDS序列,在此基础上构建针对奶山羊PrlR的腺病毒干扰载体,为研究PrlR在奶山羊乳腺乳脂合成代谢中的功能与调控作用提供有效的RNA干扰工具.首先从西农萨能羊乳腺组织RNA中扩增得到完整CDS区序列,其CDS长为1 746 bp,包含581个氨基酸序列,GenBank登录号为JF966783;测序后进行序列分析和功能预测,奶山羊PrlR基因CDS区与其他反刍动物相应序列具有较高的同源性,其跨膜区为第236～258位氨基酸;然后根据测序得到的CDS序列,在线设计合成奶山羊PrlR的shRNA序列并成功构建重组干扰腺病毒载体;将这些载体在293细胞系中进行包装和扩繁,最终获取高滴度的腺毒,使用TCID50法检测病毒滴度为5.19× 108 PFU/mL.
本文旨在剋隆奶山羊催乳素受體(PrlR)基因CDS序列,在此基礎上構建針對奶山羊PrlR的腺病毒榦擾載體,為研究PrlR在奶山羊乳腺乳脂閤成代謝中的功能與調控作用提供有效的RNA榦擾工具.首先從西農薩能羊乳腺組織RNA中擴增得到完整CDS區序列,其CDS長為1 746 bp,包含581箇氨基痠序列,GenBank登錄號為JF966783;測序後進行序列分析和功能預測,奶山羊PrlR基因CDS區與其他反芻動物相應序列具有較高的同源性,其跨膜區為第236～258位氨基痠;然後根據測序得到的CDS序列,在線設計閤成奶山羊PrlR的shRNA序列併成功構建重組榦擾腺病毒載體;將這些載體在293細胞繫中進行包裝和擴繁,最終穫取高滴度的腺毒,使用TCID50法檢測病毒滴度為5.19× 108 PFU/mL.
본문지재극륭내산양최유소수체(PrlR)기인CDS서렬,재차기출상구건침대내산양PrlR적선병독간우재체,위연구PrlR재내산양유선유지합성대사중적공능여조공작용제공유효적RNA간우공구.수선종서농살능양유선조직RNA중확증득도완정CDS구서렬,기CDS장위1 746 bp,포함581개안기산서렬,GenBank등록호위JF966783;측서후진행서렬분석화공능예측,내산양PrlR기인CDS구여기타반추동물상응서렬구유교고적동원성,기과막구위제236～258위안기산;연후근거측서득도적CDS서렬,재선설계합성내산양PrlR적shRNA서렬병성공구건중조간우선병독재체;장저사재체재293세포계중진행포장화확번,최종획취고적도적선독,사용TCID50법검측병독적도위5.19× 108 PFU/mL.
