中国实验血液学杂志
中國實驗血液學雜誌
중국실험혈액학잡지
JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
2015年
2期
350-355
,共6页
曹锦霞%文锋%王浩%廖佩%李君君
曹錦霞%文鋒%王浩%廖珮%李君君
조금하%문봉%왕호%료패%리군군
miR-328%C/EBPα%K562细胞%细胞增殖
miR-328%C/EBPα%K562細胞%細胞增殖
miR-328%C/EBPα%K562세포%세포증식
miR-328%C/EBPα%K562 cells%cell proliferation
目的:本研究旨在探讨miR-328(microRNA-328)对慢性髓系白血病(CML)急变期细胞株K562增殖的影响及C/EBP α的介导作用.方法:构建miR-328靶向基因及抑制基因的真核表达载体hsa-miR-328及hsa-miR-328-inhibitor,并分别通过脂质体lipofectamineTM2000介导转染至K562细胞;通过荧光显微镜观察细胞转染情况;通过实时荧光定量RT-PCR检测miR-328、C/EBP mRNA的表达水平;Western-Blot方法测定C/EBP α蛋白的表达;CCK-8检测细胞增殖的情况.结果:本研究通过成功构建重组真核表达载体hsa-miR-328、hsa-miR-328-inhibitor;将载体转染K562细胞,24h后在荧光显微镜下可见荧光细胞,表明载体成功转入K562细胞,48 h和72 h后可见荧光细胞数逐渐增多.实时荧光定量RT-PCR证实miR-328在K562细胞中成功表达,而miR-328对细胞C/EBP αmRNA表达无明显影响;通过Western blot检测发现miR-328恢复C/EBP α蛋白表达;细胞活力检测提示miR-328抑制K562细胞的增殖.结论:成功构建并转染miR-328基因至K562细胞,miR-328通过恢复C/EBP α的表达抑制K562细胞的增殖.
目的:本研究旨在探討miR-328(microRNA-328)對慢性髓繫白血病(CML)急變期細胞株K562增殖的影響及C/EBP α的介導作用.方法:構建miR-328靶嚮基因及抑製基因的真覈錶達載體hsa-miR-328及hsa-miR-328-inhibitor,併分彆通過脂質體lipofectamineTM2000介導轉染至K562細胞;通過熒光顯微鏡觀察細胞轉染情況;通過實時熒光定量RT-PCR檢測miR-328、C/EBP mRNA的錶達水平;Western-Blot方法測定C/EBP α蛋白的錶達;CCK-8檢測細胞增殖的情況.結果:本研究通過成功構建重組真覈錶達載體hsa-miR-328、hsa-miR-328-inhibitor;將載體轉染K562細胞,24h後在熒光顯微鏡下可見熒光細胞,錶明載體成功轉入K562細胞,48 h和72 h後可見熒光細胞數逐漸增多.實時熒光定量RT-PCR證實miR-328在K562細胞中成功錶達,而miR-328對細胞C/EBP αmRNA錶達無明顯影響;通過Western blot檢測髮現miR-328恢複C/EBP α蛋白錶達;細胞活力檢測提示miR-328抑製K562細胞的增殖.結論:成功構建併轉染miR-328基因至K562細胞,miR-328通過恢複C/EBP α的錶達抑製K562細胞的增殖.
목적:본연구지재탐토miR-328(microRNA-328)대만성수계백혈병(CML)급변기세포주K562증식적영향급C/EBP α적개도작용.방법:구건miR-328파향기인급억제기인적진핵표체재체hsa-miR-328급hsa-miR-328-inhibitor,병분별통과지질체lipofectamineTM2000개도전염지K562세포;통과형광현미경관찰세포전염정황;통과실시형광정량RT-PCR검측miR-328、C/EBP mRNA적표체수평;Western-Blot방법측정C/EBP α단백적표체;CCK-8검측세포증식적정황.결과:본연구통과성공구건중조진핵표체재체hsa-miR-328、hsa-miR-328-inhibitor;장재체전염K562세포,24h후재형광현미경하가견형광세포,표명재체성공전입K562세포,48 h화72 h후가견형광세포수축점증다.실시형광정량RT-PCR증실miR-328재K562세포중성공표체,이miR-328대세포C/EBP αmRNA표체무명현영향;통과Western blot검측발현miR-328회복C/EBP α단백표체;세포활력검측제시miR-328억제K562세포적증식.결론:성공구건병전염miR-328기인지K562세포,miR-328통과회복C/EBP α적표체억제K562세포적증식.
