CAJ | 학술논문

[目的]对绵羊痘病毒当地流行毒株的分离和其结构蛋白P32基因的克隆和序列进行分析,明确引起新疆本地绵羊流行痘病的病毒种类,掌握当前流行毒株的变异情况,为绵羊痘的预防控制及将来研制高效安全疫苗提供科学依据.[方法]将两例疑似患有羊痘的绵羊肺脏组织病料接种于MDBK细胞进行病毒分离,细胞病变组织经处理后通过电子显微镜观察分离病毒.以分离病毒基因组DNA为模板,通过PCR扩增绵羊痘病毒结构蛋白P32基因,并对目的基因进行克隆和基因序列和蛋白生物信息学分析.[结果]两例病料组织接种MDBK细胞后均产生明显的细胞病变,电子显微镜观察可见到约200 nm大小、椭圆形有囊膜的典型痘病毒粒子.对两株病毒表面膜结构蛋白P32基因PCR扩增均可获得与预期大小一致的约972 bp片段,氨基酸序列分析表明分离毒株SPV/Miquang/2013和SPV/Kuche/2013病毒P32基因与绵羊痘病毒参考株同源性分别达96.9％～99.4％和97.5％～100％,生物信息学分析发现SPV/Miquang/2013株P32蛋白有两个关键氨基酸位点发生变异,即第78位谷氨酸突变为赖氨酸,第293位异亮氨酸突变为苏氨酸.[结论]从疑似病例中分离到两株病毒,通过电镜观察及P32基因扩增测序,与其他羊痘病毒比对后鉴定分离毒株为绵羊痘病毒,分别命名为SPV/Miquan/2013和SPV/Kuche/2013.SPV/Miquan/2013的P32蛋白同其他绵羊痘病毒的两个氨基酸位点发生明显突变.
[목적]대면양두병독당지류행독주적분리화기결구단백P32기인적극륭화서렬진행분석,명학인기신강본지면양류행두병적병독충류,장악당전류행독주적변이정황,위면양두적예방공제급장래연제고효안전역묘제공과학의거.[방법]장량례의사환유양두적면양폐장조직병료접충우MDBK세포진행병독분리,세포병변조직경처리후통과전자현미경관찰분리병독.이분리병독기인조DNA위모판,통과PCR확증면양두병독결구단백P32기인,병대목적기인진행극륭화기인서렬화단백생물신식학분석.[결과]량례병료조직접충MDBK세포후균산생명현적세포병변,전자현미경관찰가견도약200 nm대소、타원형유낭막적전형두병독입자.대량주병독표면막결구단백P32기인PCR확증균가획득여예기대소일치적약972 bp편단,안기산서렬분석표명분리독주SPV/Miquang/2013화SPV/Kuche/2013병독P32기인여면양두병독삼고주동원성분별체96.9％～99.4％화97.5％～100％,생물신식학분석발현SPV/Miquang/2013주P32단백유량개관건안기산위점발생변이,즉제78위곡안산돌변위뢰안산,제293위이량안산돌변위소안산.[결론]종의사병례중분리도량주병독,통과전경관찰급P32기인확증측서,여기타양두병독비대후감정분리독주위면양두병독,분별명명위SPV/Miquan/2013화SPV/Kuche/2013.SPV/Miquan/2013적P32단백동기타면양두병독적량개안기산위점발생명현돌변.