化学与生物工程
化學與生物工程
화학여생물공정
CHEMISTRY & BIOENGINEERING
2015年
5期
55-57
,共3页
单链抗体%重叠延伸 PCR%优化
單鏈抗體%重疊延伸 PCR%優化
단련항체%중첩연신 PCR%우화
single chain antibody%splicing overlap extension PCR(SOE-PCR)%optimization
采用重叠延伸 PCR（SOE-PCR）法拼接 VH、Linker、VL，优化了 SOE-PCR 中模板量、引物量、退火温度及DNA 聚合酶量。确定了优化的连接条件为：50μL 反应体系中，SfiI-VH-Linker－232 ng，Linker＋-VL-NotI 200 ng，于64.8℃退火，7个循环后，各加入上下游引物1.5μL（10μmol·L－1），再另加 PrimeSTAR HS DNA Polymerase 0.5μL，于62.0℃退火，扩增25个循环。在改进后的连接条件下，可获得高纯度、高丰度的扩增产物，利于抗体库的多样性。
採用重疊延伸 PCR（SOE-PCR）法拼接 VH、Linker、VL，優化瞭 SOE-PCR 中模闆量、引物量、退火溫度及DNA 聚閤酶量。確定瞭優化的連接條件為：50μL 反應體繫中，SfiI-VH-Linker－232 ng，Linker＋-VL-NotI 200 ng，于64.8℃退火，7箇循環後，各加入上下遊引物1.5μL（10μmol·L－1），再另加 PrimeSTAR HS DNA Polymerase 0.5μL，于62.0℃退火，擴增25箇循環。在改進後的連接條件下，可穫得高純度、高豐度的擴增產物，利于抗體庫的多樣性。
채용중첩연신 PCR（SOE-PCR）법병접 VH、Linker、VL，우화료 SOE-PCR 중모판량、인물량、퇴화온도급DNA 취합매량。학정료우화적련접조건위：50μL 반응체계중，SfiI-VH-Linker－232 ng，Linker＋-VL-NotI 200 ng，우64.8℃퇴화，7개순배후，각가입상하유인물1.5μL（10μmol·L－1），재령가 PrimeSTAR HS DNA Polymerase 0.5μL，우62.0℃퇴화，확증25개순배。재개진후적련접조건하，가획득고순도、고봉도적확증산물，리우항체고적다양성。
Splicing overlap extension PCR(SOE-PCR)was used to connect the fragments of VH,Linker and VL.The templates amount,primers amount,annealing temperature and DNA polymerase amount in SOE-PCR system were optimized.Results showed that,in 50 μL PCR system,232 ng SfiI-VH-Linker- and 200 ng Lin-ker+-VL-NotI annealed at 64.8 ℃ for 7 cycles,after adding 1.5μL primers and 0.5μL DNA polymerase,25 cy-cles were amplified at the annealing temperature of 62.0 ℃.A high purity and abundant product that was bene-ficial to the diversity of the antibody library could be obtained by the modified ligation conditions.
