中山大学学报（医学科学版）
中山大學學報（醫學科學版）
중산대학학보（의학과학판）
JOURNAL OF SUN YAT-SEN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2015年
3期
377-384
,共8页
汤谧%张翘楚%张鹏%刘瑞磊%姜华%黄勇
湯謐%張翹楚%張鵬%劉瑞磊%薑華%黃勇
탕밀%장교초%장붕%류서뢰%강화%황용
Runx2%树突状细胞%三阴乳腺癌%基因疫苗
Runx2%樹突狀細胞%三陰乳腺癌%基因疫苗
Runx2%수돌상세포%삼음유선암%기인역묘
Runx2%dendritic cell%triple negative breast cancer%gene vaccine
[目的]探讨Runx2基因在乳腺癌中分布及Runx2-树突状细胞(DC)疫苗能否在体外诱导产生针对三阴乳腺癌的特异性抗肿瘤效应.[方法]RT-PCR、免疫细胞化学和Westernblot检测Runx2在三阴乳腺癌、非三阴乳腺癌和正常乳腺细胞中表达;提取健康人外周血并分离DC,流式检测DC表面标志;制备Runx2过表达慢病毒,转染DC并分为转染组、阴性对照组及空白组,荧光显微镜、PCR和Westernblot检测各组转染效率;将各组转染细胞与T淋巴细胞共培养,ELISA检测IL-12、IFN-γ的分泌量,MTT检测疫苗对三阴乳腺癌的特异性杀伤作用.[结果]PCR结果示Runx2在MDA-MB-231、MCF7及MCF10A中ACT值分别为10.37±0.61、11.86±0.59、12.97±0.06 (P＜ 0.05),免疫细胞化学及Western显示MDA-MB-231中Runx2蛋白呈强阳性,在MCF7及MCF10A中仅为弱阳性;本研究制备Runx2慢病毒在转染DC后可以表达丰富绿色荧光,证实Runx2基因成功转导入成熟DC中.转染组与T细胞共培养后分泌IL-12、IFN-γ量(pg/mL)分另别为170.33±5.03、517.15±5.88,而阴性对照组的分泌量仅为72.30±3.05、171.57±1.37(P＜ 0.05),同时转染组诱导的细胞毒性T细胞对三阴乳腺癌杀伤率(％)为60.02±3.51,较对照组(25.57±3.64)增强(P＜0.05).[结论]Runx2可能为三阴乳腺癌治疗新靶点,并能成功转导Runx2至DC中制备Runx2-DC疫苗,增强DC对三阴乳腺癌的靶向性,从而高效诱导该疫苗在体外对三阴乳腺癌的特异性杀伤作用.
[目的]探討Runx2基因在乳腺癌中分佈及Runx2-樹突狀細胞(DC)疫苗能否在體外誘導產生針對三陰乳腺癌的特異性抗腫瘤效應.[方法]RT-PCR、免疫細胞化學和Westernblot檢測Runx2在三陰乳腺癌、非三陰乳腺癌和正常乳腺細胞中錶達;提取健康人外週血併分離DC,流式檢測DC錶麵標誌;製備Runx2過錶達慢病毒,轉染DC併分為轉染組、陰性對照組及空白組,熒光顯微鏡、PCR和Westernblot檢測各組轉染效率;將各組轉染細胞與T淋巴細胞共培養,ELISA檢測IL-12、IFN-γ的分泌量,MTT檢測疫苗對三陰乳腺癌的特異性殺傷作用.[結果]PCR結果示Runx2在MDA-MB-231、MCF7及MCF10A中ACT值分彆為10.37±0.61、11.86±0.59、12.97±0.06 (P＜ 0.05),免疫細胞化學及Western顯示MDA-MB-231中Runx2蛋白呈彊暘性,在MCF7及MCF10A中僅為弱暘性;本研究製備Runx2慢病毒在轉染DC後可以錶達豐富綠色熒光,證實Runx2基因成功轉導入成熟DC中.轉染組與T細胞共培養後分泌IL-12、IFN-γ量(pg/mL)分另彆為170.33±5.03、517.15±5.88,而陰性對照組的分泌量僅為72.30±3.05、171.57±1.37(P＜ 0.05),同時轉染組誘導的細胞毒性T細胞對三陰乳腺癌殺傷率(％)為60.02±3.51,較對照組(25.57±3.64)增彊(P＜0.05).[結論]Runx2可能為三陰乳腺癌治療新靶點,併能成功轉導Runx2至DC中製備Runx2-DC疫苗,增彊DC對三陰乳腺癌的靶嚮性,從而高效誘導該疫苗在體外對三陰乳腺癌的特異性殺傷作用.
[목적]탐토Runx2기인재유선암중분포급Runx2-수돌상세포(DC)역묘능부재체외유도산생침대삼음유선암적특이성항종류효응.[방법]RT-PCR、면역세포화학화Westernblot검측Runx2재삼음유선암、비삼음유선암화정상유선세포중표체;제취건강인외주혈병분리DC,류식검측DC표면표지;제비Runx2과표체만병독,전염DC병분위전염조、음성대조조급공백조,형광현미경、PCR화Westernblot검측각조전염효솔;장각조전염세포여T림파세포공배양,ELISA검측IL-12、IFN-γ적분비량,MTT검측역묘대삼음유선암적특이성살상작용.[결과]PCR결과시Runx2재MDA-MB-231、MCF7급MCF10A중ACT치분별위10.37±0.61、11.86±0.59、12.97±0.06 (P＜ 0.05),면역세포화학급Western현시MDA-MB-231중Runx2단백정강양성,재MCF7급MCF10A중부위약양성;본연구제비Runx2만병독재전염DC후가이표체봉부록색형광,증실Runx2기인성공전도입성숙DC중.전염조여T세포공배양후분비IL-12、IFN-γ량(pg/mL)분령별위170.33±5.03、517.15±5.88,이음성대조조적분비량부위72.30±3.05、171.57±1.37(P＜ 0.05),동시전염조유도적세포독성T세포대삼음유선암살상솔(％)위60.02±3.51,교대조조(25.57±3.64)증강(P＜0.05).[결론]Runx2가능위삼음유선암치료신파점,병능성공전도Runx2지DC중제비Runx2-DC역묘,증강DC대삼음유선암적파향성,종이고효유도해역묘재체외대삼음유선암적특이성살상작용.
