基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2015年
6期
754-760
,共7页
白丽鹏%陈翀%刘妍%谢俊岭%王威%罗云萍
白麗鵬%陳翀%劉妍%謝俊嶺%王威%囉雲萍
백려붕%진충%류연%사준령%왕위%라운평
LIN28B%肿瘤干细胞%肿瘤相关干性%miRNAs
LIN28B%腫瘤榦細胞%腫瘤相關榦性%miRNAs
LIN28B%종류간세포%종류상관간성%miRNAs
LIN28B%cancer stem cells%tumor associated stemness%miRNAs
目的 研究LIN28B对人乳腺癌细胞(MCF-7)肿瘤干细胞的干性状态维持的作用机制.方法 在MCF-7细胞中瞬时过表达LIN28B,用qPCR和Western blot检测干性相关基因SOX2、NAONG、c-Myc和OCT4的表达;用流式细胞仪检测CD44high/CD24low细胞亚群的比例;利用体外成球培养检测肿瘤干细胞自我更新的能力,通过RNA第二代测序技术检测在LIN28B过表达后MCF-7细胞中miRNAs的表达差异,通过转染差异表达的miRNA,检测其对MCF-7细胞肿瘤干细胞比例和体外成球能力的影响.结果 转染p-CMV6-LIN28B后能明显提高LIN28B的mRNA和蛋白水平(P＜0.001);过表达LIN28B后MCF-7细胞中SOX2、NANOG和OCT4在RNA和蛋白水平表达都明显增高(P ＜0.05);CD44high/CD24low细胞比例由1.71％上升至11.60％ (P ＜0.05);体外成球培养发现成球细胞数量明显增多(P＜0.01);通过RNA测序发现有16个miRNAs在LIN28B过表达后差异表达倍数在2倍以上且P＜0.05,LIN28B过表达后miR-92b-5p表达显著上调(P＜0.01);转染miR-92b-5p mimic后MCF-7细胞的CD44high/CD24low细胞比例由1.14％上升至3.59％ (P ＜0.05),体外成球能力明显增强(P＜0.01).结论 LIN28B能维持MCF-7肿瘤干细胞的干性状态,其作用机制可能是通过miRNAs的表达来实现的.
目的 研究LIN28B對人乳腺癌細胞(MCF-7)腫瘤榦細胞的榦性狀態維持的作用機製.方法 在MCF-7細胞中瞬時過錶達LIN28B,用qPCR和Western blot檢測榦性相關基因SOX2、NAONG、c-Myc和OCT4的錶達;用流式細胞儀檢測CD44high/CD24low細胞亞群的比例;利用體外成毬培養檢測腫瘤榦細胞自我更新的能力,通過RNA第二代測序技術檢測在LIN28B過錶達後MCF-7細胞中miRNAs的錶達差異,通過轉染差異錶達的miRNA,檢測其對MCF-7細胞腫瘤榦細胞比例和體外成毬能力的影響.結果 轉染p-CMV6-LIN28B後能明顯提高LIN28B的mRNA和蛋白水平(P＜0.001);過錶達LIN28B後MCF-7細胞中SOX2、NANOG和OCT4在RNA和蛋白水平錶達都明顯增高(P ＜0.05);CD44high/CD24low細胞比例由1.71％上升至11.60％ (P ＜0.05);體外成毬培養髮現成毬細胞數量明顯增多(P＜0.01);通過RNA測序髮現有16箇miRNAs在LIN28B過錶達後差異錶達倍數在2倍以上且P＜0.05,LIN28B過錶達後miR-92b-5p錶達顯著上調(P＜0.01);轉染miR-92b-5p mimic後MCF-7細胞的CD44high/CD24low細胞比例由1.14％上升至3.59％ (P ＜0.05),體外成毬能力明顯增彊(P＜0.01).結論 LIN28B能維持MCF-7腫瘤榦細胞的榦性狀態,其作用機製可能是通過miRNAs的錶達來實現的.
목적 연구LIN28B대인유선암세포(MCF-7)종류간세포적간성상태유지적작용궤제.방법 재MCF-7세포중순시과표체LIN28B,용qPCR화Western blot검측간성상관기인SOX2、NAONG、c-Myc화OCT4적표체;용류식세포의검측CD44high/CD24low세포아군적비례;이용체외성구배양검측종류간세포자아경신적능력,통과RNA제이대측서기술검측재LIN28B과표체후MCF-7세포중miRNAs적표체차이,통과전염차이표체적miRNA,검측기대MCF-7세포종류간세포비례화체외성구능력적영향.결과 전염p-CMV6-LIN28B후능명현제고LIN28B적mRNA화단백수평(P＜0.001);과표체LIN28B후MCF-7세포중SOX2、NANOG화OCT4재RNA화단백수평표체도명현증고(P ＜0.05);CD44high/CD24low세포비례유1.71％상승지11.60％ (P ＜0.05);체외성구배양발현성구세포수량명현증다(P＜0.01);통과RNA측서발현유16개miRNAs재LIN28B과표체후차이표체배수재2배이상차P＜0.05,LIN28B과표체후miR-92b-5p표체현저상조(P＜0.01);전염miR-92b-5p mimic후MCF-7세포적CD44high/CD24low세포비례유1.14％상승지3.59％ (P ＜0.05),체외성구능력명현증강(P＜0.01).결론 LIN28B능유지MCF-7종류간세포적간성상태,기작용궤제가능시통과miRNAs적표체래실현적.
