中华泌尿外科杂志
中華泌尿外科雜誌
중화비뇨외과잡지
CHINESE JOURNAL OF UROLOGY
2015年
6期
463-467,468
,共6页
杨晓峰%赵扬%贾新友%李俊%刘仍新%王玮%刘杰昊%凡振威
楊曉峰%趙颺%賈新友%李俊%劉仍新%王瑋%劉傑昊%凡振威
양효봉%조양%가신우%리준%류잉신%왕위%류걸호%범진위
膀胱肿瘤%导向肽%荧光分子探针%光学分子影像%分子诊断
膀胱腫瘤%導嚮肽%熒光分子探針%光學分子影像%分子診斷
방광종류%도향태%형광분자탐침%광학분자영상%분자진단
Urinary bladder neoplasms%Tumor homing peptide%Fluorescent molecular probe%Optical molecular imaging%Molecule diagnosis
目的：研究膀胱肿瘤导向肽CSNRDARRC多肽序列与异硫氰酸荧光素（ fluorescein isothiocyanate，FITC）制备的荧光分子，在体外内标记膀胱肿瘤细胞、肿瘤组织的光学分子影像学特征，为内镜光学分子影像诊断膀胱肿瘤的研究提供理论基础。方法固相合成法制备 FITC－CSNRDARRC荧光分子探针，采用激光共聚焦显微镜显微成像技术、免疫荧光组织化学技术、活体光学分子荧光成像技术以及常规内镜摄像技术，分别在细胞、组织和活体水平，研究FITC－CSNRDARRC荧光分子探针标记膀胱肿瘤细胞的结合位点、影响结合率的因素、组织结合的特异性，及其活体体内器官分布和靶向性的研究。研究材料包括BIU－87膀胱肿瘤细胞株及其裸鼠移植瘤模型、人体膀胱肿瘤组织石蜡标本68例、人体腺性膀胱炎组织石蜡标本16例、人体肾透明细胞癌组织石蜡标本43例、人体胃腺癌石蜡标本68例以及膀胱肿瘤患者尿脱落细胞29例。结果 FITC－CSNRDARRC荧光分子探针靶向结合于膀胱肿瘤细胞的细胞核，随着探针剂量的增加，细胞荧光强度也增加，探针与细胞的结合率与探针剂量线性相关。在组织水平探针与膀胱肿瘤组织的结合率为92．5％，与肾透明细胞癌组织、胃腺癌组织、腺性膀胱炎性组织的结合率分别为9．5％、8．8％和12．5％，其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级膀胱肿瘤的荧光强度分别为435．55±10．07、664．42±16．19、881．67±10．35，探针与膀胱肿瘤的结合率与肿瘤恶性程度成正比（ P＜0．05），离体和活体研究表明该探针能够与膀胱肿瘤组织靶向特异性结合。FITC－CSNRDARRC分子探针标记离体细胞时，激光共聚焦显微镜下细胞核为亮绿色斑点，石蜡组织标本和尿脱落细胞中的癌变细胞，使用荧光显微镜可根据亮绿色斑点影像识别，活体肿瘤组织的荧光分子影像采用常规内镜摄像系统不能摄取，必须使用高灵敏电子倍增成像设备。结论 FITC－CSNRDARRC分子探针能够靶向特异性标记膀胱肿瘤细胞，标记位点位于细胞核，分子影像为亮绿色斑点。成像效果与成像系统的灵敏度密切相关，现有常规医学内镜摄像机不能呈现肿瘤光学分子影像。
目的：研究膀胱腫瘤導嚮肽CSNRDARRC多肽序列與異硫氰痠熒光素（ fluorescein isothiocyanate，FITC）製備的熒光分子，在體外內標記膀胱腫瘤細胞、腫瘤組織的光學分子影像學特徵，為內鏡光學分子影像診斷膀胱腫瘤的研究提供理論基礎。方法固相閤成法製備 FITC－CSNRDARRC熒光分子探針，採用激光共聚焦顯微鏡顯微成像技術、免疫熒光組織化學技術、活體光學分子熒光成像技術以及常規內鏡攝像技術，分彆在細胞、組織和活體水平，研究FITC－CSNRDARRC熒光分子探針標記膀胱腫瘤細胞的結閤位點、影響結閤率的因素、組織結閤的特異性，及其活體體內器官分佈和靶嚮性的研究。研究材料包括BIU－87膀胱腫瘤細胞株及其裸鼠移植瘤模型、人體膀胱腫瘤組織石蠟標本68例、人體腺性膀胱炎組織石蠟標本16例、人體腎透明細胞癌組織石蠟標本43例、人體胃腺癌石蠟標本68例以及膀胱腫瘤患者尿脫落細胞29例。結果 FITC－CSNRDARRC熒光分子探針靶嚮結閤于膀胱腫瘤細胞的細胞覈，隨著探針劑量的增加，細胞熒光彊度也增加，探針與細胞的結閤率與探針劑量線性相關。在組織水平探針與膀胱腫瘤組織的結閤率為92．5％，與腎透明細胞癌組織、胃腺癌組織、腺性膀胱炎性組織的結閤率分彆為9．5％、8．8％和12．5％，其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級膀胱腫瘤的熒光彊度分彆為435．55±10．07、664．42±16．19、881．67±10．35，探針與膀胱腫瘤的結閤率與腫瘤噁性程度成正比（ P＜0．05），離體和活體研究錶明該探針能夠與膀胱腫瘤組織靶嚮特異性結閤。FITC－CSNRDARRC分子探針標記離體細胞時，激光共聚焦顯微鏡下細胞覈為亮綠色斑點，石蠟組織標本和尿脫落細胞中的癌變細胞，使用熒光顯微鏡可根據亮綠色斑點影像識彆，活體腫瘤組織的熒光分子影像採用常規內鏡攝像繫統不能攝取，必鬚使用高靈敏電子倍增成像設備。結論 FITC－CSNRDARRC分子探針能夠靶嚮特異性標記膀胱腫瘤細胞，標記位點位于細胞覈，分子影像為亮綠色斑點。成像效果與成像繫統的靈敏度密切相關，現有常規醫學內鏡攝像機不能呈現腫瘤光學分子影像。
목적：연구방광종류도향태CSNRDARRC다태서렬여이류청산형광소（ fluorescein isothiocyanate，FITC）제비적형광분자，재체외내표기방광종류세포、종류조직적광학분자영상학특정，위내경광학분자영상진단방광종류적연구제공이론기출。방법고상합성법제비 FITC－CSNRDARRC형광분자탐침，채용격광공취초현미경현미성상기술、면역형광조직화학기술、활체광학분자형광성상기술이급상규내경섭상기술，분별재세포、조직화활체수평，연구FITC－CSNRDARRC형광분자탐침표기방광종류세포적결합위점、영향결합솔적인소、조직결합적특이성，급기활체체내기관분포화파향성적연구。연구재료포괄BIU－87방광종류세포주급기라서이식류모형、인체방광종류조직석사표본68례、인체선성방광염조직석사표본16례、인체신투명세포암조직석사표본43례、인체위선암석사표본68례이급방광종류환자뇨탈락세포29례。결과 FITC－CSNRDARRC형광분자탐침파향결합우방광종류세포적세포핵，수착탐침제량적증가，세포형광강도야증가，탐침여세포적결합솔여탐침제량선성상관。재조직수평탐침여방광종류조직적결합솔위92．5％，여신투명세포암조직、위선암조직、선성방광염성조직적결합솔분별위9．5％、8．8％화12．5％，기중Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ급방광종류적형광강도분별위435．55±10．07、664．42±16．19、881．67±10．35，탐침여방광종류적결합솔여종류악성정도성정비（ P＜0．05），리체화활체연구표명해탐침능구여방광종류조직파향특이성결합。FITC－CSNRDARRC분자탐침표기리체세포시，격광공취초현미경하세포핵위량록색반점，석사조직표본화뇨탈락세포중적암변세포，사용형광현미경가근거량록색반점영상식별，활체종류조직적형광분자영상채용상규내경섭상계통불능섭취，필수사용고령민전자배증성상설비。결론 FITC－CSNRDARRC분자탐침능구파향특이성표기방광종류세포，표기위점위우세포핵，분자영상위량록색반점。성상효과여성상계통적령민도밀절상관，현유상규의학내경섭상궤불능정현종류광학분자영상。
Objective To evaluate the features of optical molecular imaging of bladder tumor cells labeled by tumor homing peptide fluorescent molecular probe, and to explore the theoretical foundation of optical molecular imaging for bladder cancer diagnosis.Methods After prepared the FITC-CSNRDARRC fluorescent molecular probe, laser scanning confocal microscope, immuno fluorescence and multispectral fluorescence in vivo optical molecular imaging system have been used to evaluate the binding sites, the affecting factors of binding rates, the specificity and the targets.BIU-87 bladder tumor cell line, BIU-87 bladder tumor cell line, 68 cases of paraffin bladder tumor tissue samples, 16 cases of paraffin glandular bladder inflammatory samples, 43 cases of paraffin renal clear cell carcinoma samples, 68 cases of paraffin gastric adenocarcinoma samples, 29 cases of urine exfoliated cells suspected bladder cancer and BIU-87 bladder cancer nude xenograft have been used in this study.Results The binding site of FITC-CSNRDARRC fluorescent molecular probe were at the nucleus of labeled bladder tumor cells.The binding rates were correlated linearly with the dose of probe and the grade of pathology.The in vitro and in vivo studies demonstrate that the probe has a binding specificity with bladder tumor. When the FITC-CSNRDARRC fluorescent molecular probe labeled tumor cells, bright green spots were observed under laser scanning confocal microscope.The bright green spots were more apparent after stained by DAPI again.The tissue samples and tumor cells in the urine can be successful labeled and identified by fluorescence microscope.Optical molecular imaging of in vivo xenograft tumor tissues showed fluorescent spots under EMCCD.Conclusions The labeled loci of single cell by FITC-CSNRDARRC probe have been identified. The spatial resolution of optical molecular image is related to sensitivity of CCD, and the optical molecular imaging cannot be imaged by the conventional endoscope camera.
