石河子大学学报（自然科学版）
石河子大學學報（自然科學版）
석하자대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SHIHEZI UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE)
2015年
2期
196-200
,共5页
单增李斯特菌%pET32a%srtA基因%原核表达
單增李斯特菌%pET32a%srtA基因%原覈錶達
단증리사특균%pET32a%srtA기인%원핵표체
Listeria monocytogenes%pET32a%srtA gene%prokaryotic expression
为了探究从新疆发病绵羊中临床分离的单核细胞增多性李斯特菌(简称LM90SB2)srtA基因的特异性及其在原核表达质粒pET32a中的表达,本研究利用PCR技术扩增LM90SB2的srtA基因,测序后并进行序列比对分析,将其克隆到原核表达质粒pET32a中构成重组表达质粒pET32a-srtA.重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导使其表达,SDS-PAGE电泳检测,同时采用Western-blotting对表达产物进行了鉴定.结果表明:SrtA蛋白在BL21(DE3)中大量表达,表达产物经SDS-PAGE电泳和Western-blotting检测分析其为1个分子量为47 ku的融合蛋白,与预期的大小相符合,成功的构建了重组质粒pET32a-srtA,并使其在BL21(DE3)中获得了高效的表达.本研究为下一步研究其对李斯特菌致病性的影响及制备单克隆抗体奠定了基础.
為瞭探究從新疆髮病綿羊中臨床分離的單覈細胞增多性李斯特菌(簡稱LM90SB2)srtA基因的特異性及其在原覈錶達質粒pET32a中的錶達,本研究利用PCR技術擴增LM90SB2的srtA基因,測序後併進行序列比對分析,將其剋隆到原覈錶達質粒pET32a中構成重組錶達質粒pET32a-srtA.重組質粒轉化入大腸桿菌BL21(DE3)中,異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導使其錶達,SDS-PAGE電泳檢測,同時採用Western-blotting對錶達產物進行瞭鑒定.結果錶明:SrtA蛋白在BL21(DE3)中大量錶達,錶達產物經SDS-PAGE電泳和Western-blotting檢測分析其為1箇分子量為47 ku的融閤蛋白,與預期的大小相符閤,成功的構建瞭重組質粒pET32a-srtA,併使其在BL21(DE3)中穫得瞭高效的錶達.本研究為下一步研究其對李斯特菌緻病性的影響及製備單剋隆抗體奠定瞭基礎.
위료탐구종신강발병면양중림상분리적단핵세포증다성리사특균(간칭LM90SB2)srtA기인적특이성급기재원핵표체질립pET32a중적표체,본연구이용PCR기술확증LM90SB2적srtA기인,측서후병진행서렬비대분석,장기극륭도원핵표체질립pET32a중구성중조표체질립pET32a-srtA.중조질립전화입대장간균BL21(DE3)중,이병기류대-β-D-반유당감(IPTG)유도사기표체,SDS-PAGE전영검측,동시채용Western-blotting대표체산물진행료감정.결과표명:SrtA단백재BL21(DE3)중대량표체,표체산물경SDS-PAGE전영화Western-blotting검측분석기위1개분자량위47 ku적융합단백,여예기적대소상부합,성공적구건료중조질립pET32a-srtA,병사기재BL21(DE3)중획득료고효적표체.본연구위하일보연구기대리사특균치병성적영향급제비단극륭항체전정료기출.
