CAJ | 학술논문

目的：探讨葡萄糖酸钙对间斑寇蛛毒液致痛大鼠脊髓中致痛因子依赖于钙离子的钾离子通道蛋白（IK1）、降钙素基因相关肽（CGRP）、环氧合酶2（COX-2）、嘌呤能受体（P2X3）相对表达量的影响，研究葡萄糖酸钙在疼痛中的作用。方法将雄性 SD 大鼠80只随机分为福尔马林、10、40、100、300μL／kg 毒液致痛组（40只）和钙剂治疗组（40只），其中治疗组大鼠预先尾部静脉注射10％葡萄糖酸钙2 mL，然后两组大鼠均以5％福尔马林溶液150μL 和4种剂量（10、40、100、300μL／kg）的间斑寇蛛毒液进行足底皮下注射，24 h 后处死后，取 L4～5脊髓标本，采用免疫组化、Western blot 和荧光实时定量 PCR 技术分别从组织学、蛋白以及分子水平分析两组 P2X3、CGRP、COX-2和 IK1相对表达量。结果（1）免疫组化结果显示300μL／kg 毒液剂量时，治疗组 P2X3和 CGRP的表达显著低于致痛组，差异具有统计学意义（P ＜0．05），COX-2和 IK1的表达差异无统计学意义（P ＞0．05）。（2）Western blotting 结果显示，与致痛组各剂量相比，10μL／kg 剂量治疗组大鼠脊髓中 P2X3和 IK1表达量明显升高，CGRP 和 COX-2表达量降低，差异有统计学意义（P ＜0．05）；40μL／kg 剂量治疗组 COX-2表达量降低， CGRP、P2X3和 IK1的表达差异无统计学意义（P ＞0．05）；100μL／kg 剂量治疗组 P2X3、CGRP 和 IK1表达量明显降低，COX-2的表达量升高，差异具有统计学意义（P ＜0．05）；300μL／kg 剂量治疗组大鼠脊髓中 P2X3、CGRP、COX-2、IK1表达量明显降低，差异具有统计学意义（P ＜0．05）。（3）荧光实时定量 PCR 结果显示：10μL／kg 治疗组大鼠脊髓中 P2X3和 CGRP mRNA 的表达高于致痛组，COX-2和 IK1 mRNA 的表达低于致痛组，差异有统计学意义（P ＜0．05）；40μL／kg 治疗组 P2X3和 IK1 mRNA 的表达高于致痛组，CGRP mRNA 的表达低于致痛组，差异有统计学意义（P ＜0．05），COX-2 mRNA 的表达差异无统计学意义（P ＞0．05）；100μL／kg 治疗组 P2X3、CGRP、和 COX-2 mRNA 的表达均高于致痛组，IK1 mRNA 的表达低于致痛组，差异有统计学意义（P ＜0．05）；300μL／kg 治疗组 P2X3、CGRP、COX-2和 IK1 mRNA 的表达均高于致痛组，差异具有统计学意义（P ＜0．05）。各致痛组间 P2X3、CGRP、COX-2和 IK1 mRNA 表达差异无统计学意义（P ＞0．05）。（4）3种方法结果显示福尔马林致痛组与治疗组致痛因子的表达差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论新疆间斑寇蛛毒的致痛机制可能与大鼠脊髓中致痛因子 CGRP、P2X3、COX-2和 IK1蛋白的高表达有关，葡萄糖酸钙能显著抑制部分高浓度毒素组致痛因子 CGRP、P2X3、COX-2和 IK1蛋白的表达量，缓解疼痛的传递。目的：探討葡萄糖痠鈣對間斑寇蛛毒液緻痛大鼠脊髓中緻痛因子依賴于鈣離子的鉀離子通道蛋白（IK1）、降鈣素基因相關肽（CGRP）、環氧閤酶2（COX-2）、嘌呤能受體（P2X3）相對錶達量的影響，研究葡萄糖痠鈣在疼痛中的作用。方法將雄性 SD 大鼠80隻隨機分為福爾馬林、10、40、100、300μL／kg 毒液緻痛組（40隻）和鈣劑治療組（40隻），其中治療組大鼠預先尾部靜脈註射10％葡萄糖痠鈣2 mL，然後兩組大鼠均以5％福爾馬林溶液150μL 和4種劑量（10、40、100、300μL／kg）的間斑寇蛛毒液進行足底皮下註射，24 h 後處死後，取 L4～5脊髓標本，採用免疫組化、Western blot 和熒光實時定量 PCR 技術分彆從組織學、蛋白以及分子水平分析兩組 P2X3、CGRP、COX-2和 IK1相對錶達量。結果（1）免疫組化結果顯示300μL／kg 毒液劑量時，治療組 P2X3和 CGRP的錶達顯著低于緻痛組，差異具有統計學意義（P ＜0．05），COX-2和 IK1的錶達差異無統計學意義（P ＞0．05）。（2）Western blotting 結果顯示，與緻痛組各劑量相比，10μL／kg 劑量治療組大鼠脊髓中 P2X3和 IK1錶達量明顯升高，CGRP 和 COX-2錶達量降低，差異有統計學意義（P ＜0．05）；40μL／kg 劑量治療組 COX-2錶達量降低， CGRP、P2X3和 IK1的錶達差異無統計學意義（P ＞0．05）；100μL／kg 劑量治療組 P2X3、CGRP 和 IK1錶達量明顯降低，COX-2的錶達量升高，差異具有統計學意義（P ＜0．05）；300μL／kg 劑量治療組大鼠脊髓中 P2X3、CGRP、COX-2、IK1錶達量明顯降低，差異具有統計學意義（P ＜0．05）。（3）熒光實時定量 PCR 結果顯示：10μL／kg 治療組大鼠脊髓中 P2X3和 CGRP mRNA 的錶達高于緻痛組，COX-2和 IK1 mRNA 的錶達低于緻痛組，差異有統計學意義（P ＜0．05）；40μL／kg 治療組 P2X3和 IK1 mRNA 的錶達高于緻痛組，CGRP mRNA 的錶達低于緻痛組，差異有統計學意義（P ＜0．05），COX-2 mRNA 的錶達差異無統計學意義（P ＞0．05）；100μL／kg 治療組 P2X3、CGRP、和 COX-2 mRNA 的錶達均高于緻痛組，IK1 mRNA 的錶達低于緻痛組，差異有統計學意義（P ＜0．05）；300μL／kg 治療組 P2X3、CGRP、COX-2和 IK1 mRNA 的錶達均高于緻痛組，差異具有統計學意義（P ＜0．05）。各緻痛組間 P2X3、CGRP、COX-2和 IK1 mRNA 錶達差異無統計學意義（P ＞0．05）。（4）3種方法結果顯示福爾馬林緻痛組與治療組緻痛因子的錶達差異無統計學意義（P ＞0．05）。結論新疆間斑寇蛛毒的緻痛機製可能與大鼠脊髓中緻痛因子 CGRP、P2X3、COX-2和 IK1蛋白的高錶達有關，葡萄糖痠鈣能顯著抑製部分高濃度毒素組緻痛因子 CGRP、P2X3、COX-2和 IK1蛋白的錶達量，緩解疼痛的傳遞。
목적：탐토포도당산개대간반구주독액치통대서척수중치통인자의뢰우개리자적갑리자통도단백（IK1）、강개소기인상관태（CGRP）、배양합매2（COX-2）、표령능수체（P2X3）상대표체량적영향，연구포도당산개재동통중적작용。방법장웅성 SD 대서80지수궤분위복이마림、10、40、100、300μL／kg 독액치통조（40지）화개제치료조（40지），기중치료조대서예선미부정맥주사10％포도당산개2 mL，연후량조대서균이5％복이마림용액150μL 화4충제량（10、40、100、300μL／kg）적간반구주독액진행족저피하주사，24 h 후처사후，취 L4～5척수표본，채용면역조화、Western blot 화형광실시정량 PCR 기술분별종조직학、단백이급분자수평분석량조 P2X3、CGRP、COX-2화 IK1상대표체량。결과（1）면역조화결과현시300μL／kg 독액제량시，치료조 P2X3화 CGRP적표체현저저우치통조，차이구유통계학의의（P ＜0．05），COX-2화 IK1적표체차이무통계학의의（P ＞0．05）。（2）Western blotting 결과현시，여치통조각제량상비，10μL／kg 제량치료조대서척수중 P2X3화 IK1표체량명현승고，CGRP 화 COX-2표체량강저，차이유통계학의의（P ＜0．05）；40μL／kg 제량치료조 COX-2표체량강저， CGRP、P2X3화 IK1적표체차이무통계학의의（P ＞0．05）；100μL／kg 제량치료조 P2X3、CGRP 화 IK1표체량명현강저，COX-2적표체량승고，차이구유통계학의의（P ＜0．05）；300μL／kg 제량치료조대서척수중 P2X3、CGRP、COX-2、IK1표체량명현강저，차이구유통계학의의（P ＜0．05）。（3）형광실시정량 PCR 결과현시：10μL／kg 치료조대서척수중 P2X3화 CGRP mRNA 적표체고우치통조，COX-2화 IK1 mRNA 적표체저우치통조，차이유통계학의의（P ＜0．05）；40μL／kg 치료조 P2X3화 IK1 mRNA 적표체고우치통조，CGRP mRNA 적표체저우치통조，차이유통계학의의（P ＜0．05），COX-2 mRNA 적 표 체 차 이 무 통 계 학 의의（P ＞0．05）；100μL／kg 치료조 P2X3、CGRP、화 COX-2 mRNA 적표체균고우치통조，IK1 mRNA 적표체저우치통조，차이유통계학의의（P ＜0．05）；300μL／kg 치료조 P2X3、CGRP、COX-2화 IK1 mRNA 적표체균고우치통조，차이구유통계학의의（P ＜0．05）。각치통조간 P2X3、CGRP、COX-2화 IK1 mRNA 표체차이무통계학의의（P ＞0．05）。（4）3충방법결과현시복이마림치통조여치료조치통인자적표체차이무통계학의의（P ＞0．05）。결론신강간반구주독적치통궤제가능여대서척수중치통인자 CGRP、P2X3、COX-2화 IK1단백적고표체유관，포도당산개능현저억제부분고농도독소조치통인자 CGRP、P2X3、COX-2화 IK1단백적표체량，완해동통적전체。
Objective This study were designed to explore the inhibitory effect of calcium gluconate on the relative expression amount of induced pain factors including potassium ion channel protein calcium ion de- pendent (IK1),calcitonin gene related peptide (CGRP),cyclooxygenase 2 (COX-2),purinergic receptor (P2X3)in the rat spinal cord induced by Latrodectus tredecimguttatus venom,and to study the treatment effect of calcium gluconate on pain.Methods 80 male SD rats were randomly divided into pain group, (40)and calcium treatment group (40),the treatment group rats were given vein injection of 2 mL of 10%calcium gluconate pre tail;the other two groups of rats were given injection of 150 μL of 5% formalin so-lution and Latrodectus tredecimguttatus toxin of 4 kinds of concentrations (10,40,100,300 μL/kg).The rats were killed after 24 h and the L4-5 spinal cord was collected.The relative expression of CGRP,COX-2,P2X3,IK1 was analyzed by using immunohistochemical method,Western blotting method,and real-time fluorescence quantitative PCR technology.Results Compared with the induced pain group,the ex-pression of induced pain factor in the treatment group decreased significantly (P <0.05)by immunohisto-chemical method and Western blotting method in a dose of 300 μL/kg,The rest of the concentration of treatment group compared with the induced pain were significantly different (P <0.05),but no regularity. The results of real time fluorescent quantitative PCR are contrary to the previous two.Conclusion The possible mechanisms of pain induced by Xinjiang Latrodectus tredecimguttatus venom may be related to the level of relative expression of pain factors in rat spinal cord including CGRP P2X3,COX-2,IK1,and calcium gluconate could significantly inhibit the relative expression of CGRP,P2X3,COX-2,IK1 induced by high concentration toxin and slower the pain transfer.