动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2015年
5期
15-18
,共4页
刘杨%宋纪伟%曾范利%时坤%李健明%杜锐
劉楊%宋紀偉%曾範利%時坤%李健明%杜銳
류양%송기위%증범리%시곤%리건명%두예
结核分支杆菌%Rv3117基因%克隆%原核表达
結覈分支桿菌%Rv3117基因%剋隆%原覈錶達
결핵분지간균%Rv3117기인%극륭%원핵표체
以结核分支杆菌H37Rv株染色体DNA为模板,应用Rv3117基因特异性引物对该基因进行PCR扩增,获得约800 bp的DNA片段.将PCR纯化产物克隆至pMD-18T Vector中,构建出重组质粒pMD-18T-Rv3117.以EcoR Ⅰ和SamⅠ双酶切pMD-18T-Rv3117重组载体和pGEX-4T-1原核表达载体,并将纯化的Rv3117基因亚克隆至pGEX-4T-1中,构建出原核重组表达质粒pGEX-4T-1-Rv3117.将pGEX-4T-1-Rv3117重组质粒转化至感受态E.coli BL21中,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见约30ku目的蛋白带.Western blot分析结果显示,该蛋白能与抗结核分支杆菌阳性血清发生特异性反应.研究结果为结核病临床诊断抗原的筛选奠定了基础.
以結覈分支桿菌H37Rv株染色體DNA為模闆,應用Rv3117基因特異性引物對該基因進行PCR擴增,穫得約800 bp的DNA片段.將PCR純化產物剋隆至pMD-18T Vector中,構建齣重組質粒pMD-18T-Rv3117.以EcoR Ⅰ和SamⅠ雙酶切pMD-18T-Rv3117重組載體和pGEX-4T-1原覈錶達載體,併將純化的Rv3117基因亞剋隆至pGEX-4T-1中,構建齣原覈重組錶達質粒pGEX-4T-1-Rv3117.將pGEX-4T-1-Rv3117重組質粒轉化至感受態E.coli BL21中,經IPTG誘導和SDS-PAGE分析,可見約30ku目的蛋白帶.Western blot分析結果顯示,該蛋白能與抗結覈分支桿菌暘性血清髮生特異性反應.研究結果為結覈病臨床診斷抗原的篩選奠定瞭基礎.
이결핵분지간균H37Rv주염색체DNA위모판,응용Rv3117기인특이성인물대해기인진행PCR확증,획득약800 bp적DNA편단.장PCR순화산물극륭지pMD-18T Vector중,구건출중조질립pMD-18T-Rv3117.이EcoR Ⅰ화SamⅠ쌍매절pMD-18T-Rv3117중조재체화pGEX-4T-1원핵표체재체,병장순화적Rv3117기인아극륭지pGEX-4T-1중,구건출원핵중조표체질립pGEX-4T-1-Rv3117.장pGEX-4T-1-Rv3117중조질립전화지감수태E.coli BL21중,경IPTG유도화SDS-PAGE분석,가견약30ku목적단백대.Western blot분석결과현시,해단백능여항결핵분지간균양성혈청발생특이성반응.연구결과위결핵병림상진단항원적사선전정료기출.
