动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2015年
5期
1-5
,共5页
史梦婷%孟露萍%包海洋%付强%史慧君%王慧勤%张辉%任艳%乔军
史夢婷%孟露萍%包海洋%付彊%史慧君%王慧勤%張輝%任豔%喬軍
사몽정%맹로평%포해양%부강%사혜군%왕혜근%장휘%임염%교군
Rv2031c%慢病毒%RAW264.7细胞%细胞凋亡
Rv2031c%慢病毒%RAW264.7細胞%細胞凋亡
Rv2031c%만병독%RAW264.7세포%세포조망
研究结核分支杆菌Rv2031c基因对小鼠巨噬细胞RAW 264.7细胞凋亡的影响.根据GenBank数据库中结核分支杆菌Rv2031c的序列设计引物,以结核分支杆菌国际标准株H37Rv株灭活的菌液上清液为模版,扩增Rv2031c基因;克隆至慢病毒表达载体plex-EGFP中,经酶切和测序鉴定后,获得plex-Rv2031c-EGFP重组慢病毒载体;将重组慢病毒质粒分别与辅助质粒共转染至293T细胞中,转染48 h后收集慢病毒,并侵染RAW 264.7细胞;侵染48 h时收集细胞,用流式细胞术检测各试验组巨噬细胞的凋亡率;提取细胞总RNA并反转录成cDNA,PCR检测Rv2031c基因在细胞中的表达情况;同时,使用细胞裂解液提取细胞总蛋白,Western blot检测Rv2031c蛋白表达水平.结果表明,成功构建了Rv2031c的慢病毒表达载体plex-Rv2031c-EGFP;构建了过表达Rv2031c的慢病毒Rv2031c-lv;感染Rv2031c-lv的RAW264.7细胞的凋亡率为41.8%,而对照组EGFP-lv感染的RAW 264.7细胞其凋亡率为30.0%;PCR结果表明Rv2031c在Rv2031c-lv侵染的RAW264.7细胞中高表达;Western blot结果显示Rv2031c蛋白在Rv2031c-lv侵染的RAW264.7细胞中高表达.该研究成功构建了结核分支杆菌Rv2031c的慢病毒表达载体并验证了其对RAW 264.7细胞凋亡的影响,为结核分支杆菌在机体内潜伏期感染的药物研究奠定了基础.
研究結覈分支桿菌Rv2031c基因對小鼠巨噬細胞RAW 264.7細胞凋亡的影響.根據GenBank數據庫中結覈分支桿菌Rv2031c的序列設計引物,以結覈分支桿菌國際標準株H37Rv株滅活的菌液上清液為模版,擴增Rv2031c基因;剋隆至慢病毒錶達載體plex-EGFP中,經酶切和測序鑒定後,穫得plex-Rv2031c-EGFP重組慢病毒載體;將重組慢病毒質粒分彆與輔助質粒共轉染至293T細胞中,轉染48 h後收集慢病毒,併侵染RAW 264.7細胞;侵染48 h時收集細胞,用流式細胞術檢測各試驗組巨噬細胞的凋亡率;提取細胞總RNA併反轉錄成cDNA,PCR檢測Rv2031c基因在細胞中的錶達情況;同時,使用細胞裂解液提取細胞總蛋白,Western blot檢測Rv2031c蛋白錶達水平.結果錶明,成功構建瞭Rv2031c的慢病毒錶達載體plex-Rv2031c-EGFP;構建瞭過錶達Rv2031c的慢病毒Rv2031c-lv;感染Rv2031c-lv的RAW264.7細胞的凋亡率為41.8%,而對照組EGFP-lv感染的RAW 264.7細胞其凋亡率為30.0%;PCR結果錶明Rv2031c在Rv2031c-lv侵染的RAW264.7細胞中高錶達;Western blot結果顯示Rv2031c蛋白在Rv2031c-lv侵染的RAW264.7細胞中高錶達.該研究成功構建瞭結覈分支桿菌Rv2031c的慢病毒錶達載體併驗證瞭其對RAW 264.7細胞凋亡的影響,為結覈分支桿菌在機體內潛伏期感染的藥物研究奠定瞭基礎.
연구결핵분지간균Rv2031c기인대소서거서세포RAW 264.7세포조망적영향.근거GenBank수거고중결핵분지간균Rv2031c적서렬설계인물,이결핵분지간균국제표준주H37Rv주멸활적균액상청액위모판,확증Rv2031c기인;극륭지만병독표체재체plex-EGFP중,경매절화측서감정후,획득plex-Rv2031c-EGFP중조만병독재체;장중조만병독질립분별여보조질립공전염지293T세포중,전염48 h후수집만병독,병침염RAW 264.7세포;침염48 h시수집세포,용류식세포술검측각시험조거서세포적조망솔;제취세포총RNA병반전록성cDNA,PCR검측Rv2031c기인재세포중적표체정황;동시,사용세포렬해액제취세포총단백,Western blot검측Rv2031c단백표체수평.결과표명,성공구건료Rv2031c적만병독표체재체plex-Rv2031c-EGFP;구건료과표체Rv2031c적만병독Rv2031c-lv;감염Rv2031c-lv적RAW264.7세포적조망솔위41.8%,이대조조EGFP-lv감염적RAW 264.7세포기조망솔위30.0%;PCR결과표명Rv2031c재Rv2031c-lv침염적RAW264.7세포중고표체;Western blot결과현시Rv2031c단백재Rv2031c-lv침염적RAW264.7세포중고표체.해연구성공구건료결핵분지간균Rv2031c적만병독표체재체병험증료기대RAW 264.7세포조망적영향,위결핵분지간균재궤체내잠복기감염적약물연구전정료기출.