江苏农业科学
江囌農業科學
강소농업과학
JIANGSU AGRICULTURAL SCIENCES
2015年
5期
204-205,206
,共3页
王永娟%王岑%朱善元%左伟勇
王永娟%王岑%硃善元%左偉勇
왕영연%왕잠%주선원%좌위용
外周血%淋巴细胞%RNA提取%RT-PCR%方法比较%鹅%干扰素
外週血%淋巴細胞%RNA提取%RT-PCR%方法比較%鵝%榦擾素
외주혈%림파세포%RNA제취%RT-PCR%방법비교%아%간우소
无菌采取鹅外周血并进行抗凝处理,以全血提取法、细胞分离直接提取法、细胞分离培养提取法及细胞分离诱导提取法分别提取外周血中淋巴细胞的总RNA;紫外分光光度计检测总RNA的纯度和得率;以总RNA为模板通过RT-PCR法扩增鹅α-干扰素( GoIFN-α)基因,并构建重组质粒pGEMT-α,通过比较GoIFN-α序列确定各种提取方法的可行性。结果显示,4种方法提取的RNA纯度高,均可作为模板扩增出目的基因,满足后续的分子生物学研究;其中以细胞分离直接提取法制备的RNA产量最多,此结论为外周血淋巴细胞总RNA的提取提供了一种更快捷的方法。
無菌採取鵝外週血併進行抗凝處理,以全血提取法、細胞分離直接提取法、細胞分離培養提取法及細胞分離誘導提取法分彆提取外週血中淋巴細胞的總RNA;紫外分光光度計檢測總RNA的純度和得率;以總RNA為模闆通過RT-PCR法擴增鵝α-榦擾素( GoIFN-α)基因,併構建重組質粒pGEMT-α,通過比較GoIFN-α序列確定各種提取方法的可行性。結果顯示,4種方法提取的RNA純度高,均可作為模闆擴增齣目的基因,滿足後續的分子生物學研究;其中以細胞分離直接提取法製備的RNA產量最多,此結論為外週血淋巴細胞總RNA的提取提供瞭一種更快捷的方法。
무균채취아외주혈병진행항응처리,이전혈제취법、세포분리직접제취법、세포분리배양제취법급세포분리유도제취법분별제취외주혈중림파세포적총RNA;자외분광광도계검측총RNA적순도화득솔;이총RNA위모판통과RT-PCR법확증아α-간우소( GoIFN-α)기인,병구건중조질립pGEMT-α,통과비교GoIFN-α서렬학정각충제취방법적가행성。결과현시,4충방법제취적RNA순도고,균가작위모판확증출목적기인,만족후속적분자생물학연구;기중이세포분리직접제취법제비적RNA산량최다,차결론위외주혈림파세포총RNA적제취제공료일충경쾌첩적방법。