中国海洋大学学报(自然科学版)
中國海洋大學學報(自然科學版)
중국해양대학학보(자연과학판)
PERIODICAL OF OCEAN UNIVERSITY OF CHINA
2015年
6期
57-63
,共7页
中国明对虾%蛋白酶%分离纯化%酶学性质
中國明對蝦%蛋白酶%分離純化%酶學性質
중국명대하%단백매%분리순화%매학성질
Fenneropenaeus chinensis%protease%isolation and purification%enzyme properties
以中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)肝胰脏为材料,通过硫酸铵沉淀分级分离、Sephadex G-100和DEAE-32柱层析纯化,经PAGE获得蛋白酶,该酶的比活力为96.752 U/mg.SDS-PAGE显示一谱带,测得酶亚基分子量为36.3kDa,凝胶层析法测得酶分子量为100.9 kDa,推断该蛋白酶由3个相同亚基组成,等电聚焦电泳法测得酶的等电点pI为9.65.以酪蛋白为底物,研究蛋白酶催化反应的动力学参数.结果表明:蛋白酶的最适pH、最适温度、Km和Vmax分别为8.0、65℃、4.578 mg/mL和0.273 U/min;酶在pH为5.0~10.0范围内较稳定,在20~45℃之间具有较好的热稳定性,在50℃以上热稳定性迅速下降.Mg2+对酶活力没有影响,Ca2+、Ba2+、Cu2+、Mn2+、Co2+、Zn2+和Hg2+对酶有不同程度的抑制作用,其中Hg2+的抑制作用最强,10 mmol/L Hg2+可使酶活力完全丧失,而Fe2+对酶有激活作用.EDTA对酶活力没有影响,推断该蛋白酶为非金属蛋白酶.
以中國明對蝦(Fenneropenaeus chinensis)肝胰髒為材料,通過硫痠銨沉澱分級分離、Sephadex G-100和DEAE-32柱層析純化,經PAGE穫得蛋白酶,該酶的比活力為96.752 U/mg.SDS-PAGE顯示一譜帶,測得酶亞基分子量為36.3kDa,凝膠層析法測得酶分子量為100.9 kDa,推斷該蛋白酶由3箇相同亞基組成,等電聚焦電泳法測得酶的等電點pI為9.65.以酪蛋白為底物,研究蛋白酶催化反應的動力學參數.結果錶明:蛋白酶的最適pH、最適溫度、Km和Vmax分彆為8.0、65℃、4.578 mg/mL和0.273 U/min;酶在pH為5.0~10.0範圍內較穩定,在20~45℃之間具有較好的熱穩定性,在50℃以上熱穩定性迅速下降.Mg2+對酶活力沒有影響,Ca2+、Ba2+、Cu2+、Mn2+、Co2+、Zn2+和Hg2+對酶有不同程度的抑製作用,其中Hg2+的抑製作用最彊,10 mmol/L Hg2+可使酶活力完全喪失,而Fe2+對酶有激活作用.EDTA對酶活力沒有影響,推斷該蛋白酶為非金屬蛋白酶.
이중국명대하(Fenneropenaeus chinensis)간이장위재료,통과류산안침정분급분리、Sephadex G-100화DEAE-32주층석순화,경PAGE획득단백매,해매적비활력위96.752 U/mg.SDS-PAGE현시일보대,측득매아기분자량위36.3kDa,응효층석법측득매분자량위100.9 kDa,추단해단백매유3개상동아기조성,등전취초전영법측득매적등전점pI위9.65.이락단백위저물,연구단백매최화반응적동역학삼수.결과표명:단백매적최괄pH、최괄온도、Km화Vmax분별위8.0、65℃、4.578 mg/mL화0.273 U/min;매재pH위5.0~10.0범위내교은정,재20~45℃지간구유교호적열은정성,재50℃이상열은정성신속하강.Mg2+대매활력몰유영향,Ca2+、Ba2+、Cu2+、Mn2+、Co2+、Zn2+화Hg2+대매유불동정도적억제작용,기중Hg2+적억제작용최강,10 mmol/L Hg2+가사매활력완전상실,이Fe2+대매유격활작용.EDTA대매활력몰유영향,추단해단백매위비금속단백매.