江苏农业科学
江囌農業科學
강소농업과학
JIANGSU AGRICULTURAL SCIENCES
2015年
5期
42-45
,共4页
赵联正%谢占玲%赵朋
趙聯正%謝佔玲%趙朋
조련정%사점령%조붕
镰刀菌%木聚糖酶%分离纯化%串联质谱鉴定%酶学特性
鐮刀菌%木聚糖酶%分離純化%串聯質譜鑒定%酶學特性
렴도균%목취당매%분리순화%천련질보감정%매학특성
为对植物病原菌镰刀菌( Fusarium sp.) Q7-31所产木聚糖酶进行鉴定及酶学特性分析,在发酵产酶培养基上对Q7-31进行发酵培养,获得能够高效降解植物细胞壁的粗酶液。然后,采用Sephacry S-100凝胶柱层析和DEAE弱阴离子交换柱层析对粗酶液进行分离纯化后得到木聚糖酶Xyn9,并对其开展蛋白质组学研究和酶学特性分析。结果表明:粗酶液中木聚糖酶比活为16.58 U/mg,纤维素酶比活为0.428 U/mg,细胞壁降解酶比活为0.0198 U/mg,蛋白含量为2.17 mg/mL。 Xyn9的蛋白质组学研究结果显示,其分子量为21 ku、等电点为6.86,接近GH10家族。纯化后Xyn9的酶学特性表明,最适反应温度为47℃,最适pH值为5.6,该酶在33℃以下和在pH值5~6的范围内较稳定;金属离子K+对该酶有激活作用,Na+、Ca2+、Mg2+、Zn2+抑制该酶活性,Cu2+、Hg+使该酶完全失活。综合Xyn9的分子量、蛋白质组学结果以及酶学特性,最终将其鉴定为一种新的介于GH10家族与GH11家族之间的内切木聚糖酶。
為對植物病原菌鐮刀菌( Fusarium sp.) Q7-31所產木聚糖酶進行鑒定及酶學特性分析,在髮酵產酶培養基上對Q7-31進行髮酵培養,穫得能夠高效降解植物細胞壁的粗酶液。然後,採用Sephacry S-100凝膠柱層析和DEAE弱陰離子交換柱層析對粗酶液進行分離純化後得到木聚糖酶Xyn9,併對其開展蛋白質組學研究和酶學特性分析。結果錶明:粗酶液中木聚糖酶比活為16.58 U/mg,纖維素酶比活為0.428 U/mg,細胞壁降解酶比活為0.0198 U/mg,蛋白含量為2.17 mg/mL。 Xyn9的蛋白質組學研究結果顯示,其分子量為21 ku、等電點為6.86,接近GH10傢族。純化後Xyn9的酶學特性錶明,最適反應溫度為47℃,最適pH值為5.6,該酶在33℃以下和在pH值5~6的範圍內較穩定;金屬離子K+對該酶有激活作用,Na+、Ca2+、Mg2+、Zn2+抑製該酶活性,Cu2+、Hg+使該酶完全失活。綜閤Xyn9的分子量、蛋白質組學結果以及酶學特性,最終將其鑒定為一種新的介于GH10傢族與GH11傢族之間的內切木聚糖酶。
위대식물병원균렴도균( Fusarium sp.) Q7-31소산목취당매진행감정급매학특성분석,재발효산매배양기상대Q7-31진행발효배양,획득능구고효강해식물세포벽적조매액。연후,채용Sephacry S-100응효주층석화DEAE약음리자교환주층석대조매액진행분리순화후득도목취당매Xyn9,병대기개전단백질조학연구화매학특성분석。결과표명:조매액중목취당매비활위16.58 U/mg,섬유소매비활위0.428 U/mg,세포벽강해매비활위0.0198 U/mg,단백함량위2.17 mg/mL。 Xyn9적단백질조학연구결과현시,기분자량위21 ku、등전점위6.86,접근GH10가족。순화후Xyn9적매학특성표명,최괄반응온도위47℃,최괄pH치위5.6,해매재33℃이하화재pH치5~6적범위내교은정;금속리자K+대해매유격활작용,Na+、Ca2+、Mg2+、Zn2+억제해매활성,Cu2+、Hg+사해매완전실활。종합Xyn9적분자량、단백질조학결과이급매학특성,최종장기감정위일충신적개우GH10가족여GH11가족지간적내절목취당매。