湖北农业科学
湖北農業科學
호북농업과학
2015年
1期
126-129,133
,共5页
余波%周思旋%谭诗文%徐景峨%史开志%杨莉
餘波%週思鏇%譚詩文%徐景峨%史開誌%楊莉
여파%주사선%담시문%서경아%사개지%양리
猪细小病毒%VP2基因%SYBR Green Ⅰ荧光定量
豬細小病毒%VP2基因%SYBR Green Ⅰ熒光定量
저세소병독%VP2기인%SYBR Green Ⅰ형광정량
PPV%VP2 gene%SYBR green Ⅰ fluorescent quantitative PCR
根据GenBank中猪细小病毒VP2基因序列设计特异性的引物,PCR扩增获得猪细小病毒VP2基因片段,并克隆到pMD-18T载体上作为阳性标准品.通过对SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR反应条件的优化,建立了猪细小病毒的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR诊断方法,以此为基础研制出试剂盒.试剂盒扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,对PRV、PCV-2、E.coli、CSFV、PRRSV均无阳性信号扩增,可重复性好,测灵敏度可达1.0×101拷贝/μL.结果表明,研制的猪细小病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR试剂盒具有特异、灵敏、快速、重复性好等优点,适合于猪细小病毒临床样品的检测.
根據GenBank中豬細小病毒VP2基因序列設計特異性的引物,PCR擴增穫得豬細小病毒VP2基因片段,併剋隆到pMD-18T載體上作為暘性標準品.通過對SYBR Green Ⅰ熒光定量PCR反應條件的優化,建立瞭豬細小病毒的SYBR Green Ⅰ熒光定量PCR診斷方法,以此為基礎研製齣試劑盒.試劑盒擴增產物的鎔解麯線分析隻齣現1箇單特異峰,無引物二聚體,對PRV、PCV-2、E.coli、CSFV、PRRSV均無暘性信號擴增,可重複性好,測靈敏度可達1.0×101拷貝/μL.結果錶明,研製的豬細小病毒SYBR Green Ⅰ實時熒光定量PCR試劑盒具有特異、靈敏、快速、重複性好等優點,適閤于豬細小病毒臨床樣品的檢測.
근거GenBank중저세소병독VP2기인서렬설계특이성적인물,PCR확증획득저세소병독VP2기인편단,병극륭도pMD-18T재체상작위양성표준품.통과대SYBR Green Ⅰ형광정량PCR반응조건적우화,건립료저세소병독적SYBR Green Ⅰ형광정량PCR진단방법,이차위기출연제출시제합.시제합확증산물적용해곡선분석지출현1개단특이봉,무인물이취체,대PRV、PCV-2、E.coli、CSFV、PRRSV균무양성신호확증,가중복성호,측령민도가체1.0×101고패/μL.결과표명,연제적저세소병독SYBR Green Ⅰ실시형광정량PCR시제합구유특이、령민、쾌속、중복성호등우점,괄합우저세소병독림상양품적검측.
