CAJ | 학술논문

根据猪瘟病毒衣壳蛋白(Core)基因序列设计一对特异性引物,RT-PCR从猪瘟兔化弱毒中扩增出完整的Core基因,经酶切和序列测定后,克隆到携带His标签的原核表达载体pColdI中,成功构建了重组质粒pCold-Core,并转化到大肠杆菌Rosseta 2(R2)中;利用IPTG诱导表达目的蛋白并鉴定表达效果.结果表明:经终浓度为0.1 mmol/L IPTG诱导24 h后,Core基因在R2中获得分泌性可溶表达,表达量占菌体蛋白的32.6％,SDS-PAGE显示目的蛋白相对分子质量为20 ku.Western blot结果显示Core蛋白可以分别与His单抗和猪瘟病毒阳性抗血清发生特异性反应,均出现单一反应带.将目的蛋白切胶后免疫Balb/c小鼠,制备特异性抗血清,Western blot结果显示该抗血清与衣壳蛋白反应后有明显的特异性条带,经激光共聚焦鉴定抗血清能够与胞浆中的猪瘟病毒粒子发生反应.结果表明,Core基因表达成功,制备的抗血清具有生物学功能.本研究为深入探讨Core蛋白在猪瘟病毒致病机制上的作用奠定了基础.
근거저온병독의각단백(Core)기인서렬설계일대특이성인물,RT-PCR종저온토화약독중확증출완정적Core기인,경매절화서렬측정후,극륭도휴대His표첨적원핵표체재체pColdI중,성공구건료중조질립pCold-Core,병전화도대장간균Rosseta 2(R2)중;이용IPTG유도표체목적단백병감정표체효과.결과표명:경종농도위0.1 mmol/L IPTG유도24 h후,Core기인재R2중획득분비성가용표체,표체량점균체단백적32.6％,SDS-PAGE현시목적단백상대분자질량위20 ku.Western blot결과현시Core단백가이분별여His단항화저온병독양성항혈청발생특이성반응,균출현단일반응대.장목적단백절효후면역Balb/c소서,제비특이성항혈청,Western blot결과현시해항혈청여의각단백반응후유명현적특이성조대,경격광공취초감정항혈청능구여포장중적저온병독입자발생반응.결과표명,Core기인표체성공,제비적항혈청구유생물학공능.본연구위심입탐토Core단백재저온병독치병궤제상적작용전정료기출.