中国兽医杂志
中國獸醫雜誌
중국수의잡지
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY MEDICINE
2015年
4期
20-23,26
,共5页
何至远%吴海洋%王永强%李晓齐%曹红%郑世军
何至遠%吳海洋%王永彊%李曉齊%曹紅%鄭世軍
하지원%오해양%왕영강%리효제%조홍%정세군
禽呼肠孤病毒%p10蛋白%原核表达%单克隆抗体
禽呼腸孤病毒%p10蛋白%原覈錶達%單剋隆抗體
금호장고병독%p10단백%원핵표체%단극륭항체
为了深入研究禽呼肠孤病毒(ARV)的致病机理,从其基因组中克隆病毒非结构蛋白p10基因,并将其与原核表达载体连接,转入大肠杆菌BL21中,使其表达携带His标签的p10融合蛋白,经镍柱纯化得到高纯度重组p10蛋白,以该蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,经过3次亚克隆后获得2株能够稳定分泌针对p10蛋白的杂交瘤细胞株,分别命名为2B12与4H10.通过间接ELISA(Enzyme-linked immunosorbentassay)方法测定其腹水效价均为1∶1.01×107,亲合力解离常数(kD)分别为3.91×10-10、5.75×10-10,2株单抗的IgG亚型均为IgG2b.经Western Blot鉴定,该2株抗体均能特异性识别ARV感染DF-1细胞中的p10蛋白.这些单抗的制备为深入研究ARV的致病机理奠定了基础.
為瞭深入研究禽呼腸孤病毒(ARV)的緻病機理,從其基因組中剋隆病毒非結構蛋白p10基因,併將其與原覈錶達載體連接,轉入大腸桿菌BL21中,使其錶達攜帶His標籤的p10融閤蛋白,經鎳柱純化得到高純度重組p10蛋白,以該蛋白為免疫原免疫BALB/c小鼠,將免疫小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞(SP2/0)進行融閤,經過3次亞剋隆後穫得2株能夠穩定分泌針對p10蛋白的雜交瘤細胞株,分彆命名為2B12與4H10.通過間接ELISA(Enzyme-linked immunosorbentassay)方法測定其腹水效價均為1∶1.01×107,親閤力解離常數(kD)分彆為3.91×10-10、5.75×10-10,2株單抗的IgG亞型均為IgG2b.經Western Blot鑒定,該2株抗體均能特異性識彆ARV感染DF-1細胞中的p10蛋白.這些單抗的製備為深入研究ARV的緻病機理奠定瞭基礎.
위료심입연구금호장고병독(ARV)적치병궤리,종기기인조중극륭병독비결구단백p10기인,병장기여원핵표체재체련접,전입대장간균BL21중,사기표체휴대His표첨적p10융합단백,경얼주순화득도고순도중조p10단백,이해단백위면역원면역BALB/c소서,장면역소서적비세포여골수류세포(SP2/0)진행융합,경과3차아극륭후획득2주능구은정분비침대p10단백적잡교류세포주,분별명명위2B12여4H10.통과간접ELISA(Enzyme-linked immunosorbentassay)방법측정기복수효개균위1∶1.01×107,친합력해리상수(kD)분별위3.91×10-10、5.75×10-10,2주단항적IgG아형균위IgG2b.경Western Blot감정,해2주항체균능특이성식별ARV감염DF-1세포중적p10단백.저사단항적제비위심입연구ARV적치병궤리전정료기출.
