中国兽医杂志
中國獸醫雜誌
중국수의잡지
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY MEDICINE
2015年
4期
3-6,9
,共5页
陈延飞%覃尧%李夏莹%王永强%李晓齐%曹红%郑世军
陳延飛%覃堯%李夏瑩%王永彊%李曉齊%曹紅%鄭世軍
진연비%담요%리하형%왕영강%리효제%조홍%정세군
鸡传染性贫血病毒%VP2蛋白%原核表达%单克隆抗体
鷄傳染性貧血病毒%VP2蛋白%原覈錶達%單剋隆抗體
계전염성빈혈병독%VP2단백%원핵표체%단극륭항체
为制备CIAV VP2单克隆抗体,将原核表达的His-VP2融合蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠.经4次免疫后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合.将原核表达的GST-VP2融合蛋白作为包被抗原,利用间接ELISA筛选阳性克隆.阳性细胞株经3次亚克隆后,获得3株稳定分泌抗CIAV VP2蛋白的杂交瘤细胞克隆,分别命名为3D7、3B8、2D3.经间接ELISA测定,以上3株杂交瘤细胞腹水效价分别为1∶8.0× 105、1∶4.0×105,以及1∶6.4×106,亲和力解离常数分别为7.34×10-11、2.65× 10-11,以及2.98×10-11.IgG亚类分别为IgG1、IgG2b以及IgG2b.经Western Blot试验证明,3D7株单抗能特异地识别CIAV VP2蛋白,其识别的抗原表位区域为VP2 N-端的20～40 aa.经IFA试验证明,3株单抗均能识别天然的CIAV VP2蛋白.此单抗为研究CIAV VP2的生物学功能和CIAV致病机理奠定基础.
為製備CIAV VP2單剋隆抗體,將原覈錶達的His-VP2融閤蛋白作為免疫原免疫BALB/c小鼠.經4次免疫後,取小鼠脾細胞與骨髓瘤細胞(SP2/0)融閤.將原覈錶達的GST-VP2融閤蛋白作為包被抗原,利用間接ELISA篩選暘性剋隆.暘性細胞株經3次亞剋隆後,穫得3株穩定分泌抗CIAV VP2蛋白的雜交瘤細胞剋隆,分彆命名為3D7、3B8、2D3.經間接ELISA測定,以上3株雜交瘤細胞腹水效價分彆為1∶8.0× 105、1∶4.0×105,以及1∶6.4×106,親和力解離常數分彆為7.34×10-11、2.65× 10-11,以及2.98×10-11.IgG亞類分彆為IgG1、IgG2b以及IgG2b.經Western Blot試驗證明,3D7株單抗能特異地識彆CIAV VP2蛋白,其識彆的抗原錶位區域為VP2 N-耑的20～40 aa.經IFA試驗證明,3株單抗均能識彆天然的CIAV VP2蛋白.此單抗為研究CIAV VP2的生物學功能和CIAV緻病機理奠定基礎.
위제비CIAV VP2단극륭항체,장원핵표체적His-VP2융합단백작위면역원면역BALB/c소서.경4차면역후,취소서비세포여골수류세포(SP2/0)융합.장원핵표체적GST-VP2융합단백작위포피항원,이용간접ELISA사선양성극륭.양성세포주경3차아극륭후,획득3주은정분비항CIAV VP2단백적잡교류세포극륭,분별명명위3D7、3B8、2D3.경간접ELISA측정,이상3주잡교류세포복수효개분별위1∶8.0× 105、1∶4.0×105,이급1∶6.4×106,친화력해리상수분별위7.34×10-11、2.65× 10-11,이급2.98×10-11.IgG아류분별위IgG1、IgG2b이급IgG2b.경Western Blot시험증명,3D7주단항능특이지식별CIAV VP2단백,기식별적항원표위구역위VP2 N-단적20～40 aa.경IFA시험증명,3주단항균능식별천연적CIAV VP2단백.차단항위연구CIAV VP2적생물학공능화CIAV치병궤리전정기출.
