中国防痨杂志
中國防癆雜誌
중국방로잡지
BULLETIN OF THE CHINESE ANTITUBERCULOSIS ASSOCIATION
2015年
5期
478-486
,共9页
许静%任百光%程海丽%刘怀钰%魏文丰%邓朗萍%封胜雪%毕利军
許靜%任百光%程海麗%劉懷鈺%魏文豐%鄧朗萍%封勝雪%畢利軍
허정%임백광%정해려%류부옥%위문봉%산랑평%봉성설%필리군
结核分枝杆菌%重组融合蛋白质类%高通量筛选分析
結覈分枝桿菌%重組融閤蛋白質類%高通量篩選分析
결핵분지간균%중조융합단백질류%고통량사선분석
Mycobacterium tuberculosis%Recombinant fusion proteins%High-throughput screening assays
目的 为了改变结核分枝杆菌蛋白质的结构与功能研究由于受结核分枝杆菌蛋白难以可溶性表达和纯化的影响而进展缓慢的问题.方法 将多个能促进可溶性表达的蛋白标签与高通量的Gateway克隆技术相结合,构建结核分枝杆菌蛋白可溶性表达快速通量的筛选平台.挑选46个不同分子量且已知以包涵体形式表达或者不表达的结核分枝杆菌蛋白的基因,分别克隆到带有N-末端的氮源利用物质A(N utilization substance A,NusA)、小分子泛素样修饰蛋白(small ubiquitin-like modifier-1,SUMO)、麦芽糖结合蛋白(maltose-binding protein,MBP)、硫氧还蛋白(thioredoxin A,TrxA)、酰基载体蛋白(acyl carrier protein,ACP)五种蛋白标签基因的载体上,进行融合表达,分析比较各标签促进可溶性表达的效果.结果 融合NusA标签后,19个蛋白以可溶性形式表达,占总样本的41％(19/46);同时融合SUMO、MBP、TrxA、ACP标签后,可溶性表达的蛋白也分别达到总样本数的22％ (10/46)、26％(12/46)、26％(12/46)、22％ (10/46).结论 结核分枝杆菌蛋白可溶性表达快速通量筛选平台的建立,实现了结核分枝杆菌重组蛋白可溶性表达的快速通量筛选,为更进一步研究结核分枝杆菌蛋白、特别是重要药物靶标蛋白的结构与功能创造了条件.
目的 為瞭改變結覈分枝桿菌蛋白質的結構與功能研究由于受結覈分枝桿菌蛋白難以可溶性錶達和純化的影響而進展緩慢的問題.方法 將多箇能促進可溶性錶達的蛋白標籤與高通量的Gateway剋隆技術相結閤,構建結覈分枝桿菌蛋白可溶性錶達快速通量的篩選平檯.挑選46箇不同分子量且已知以包涵體形式錶達或者不錶達的結覈分枝桿菌蛋白的基因,分彆剋隆到帶有N-末耑的氮源利用物質A(N utilization substance A,NusA)、小分子汎素樣脩飾蛋白(small ubiquitin-like modifier-1,SUMO)、麥芽糖結閤蛋白(maltose-binding protein,MBP)、硫氧還蛋白(thioredoxin A,TrxA)、酰基載體蛋白(acyl carrier protein,ACP)五種蛋白標籤基因的載體上,進行融閤錶達,分析比較各標籤促進可溶性錶達的效果.結果 融閤NusA標籤後,19箇蛋白以可溶性形式錶達,佔總樣本的41％(19/46);同時融閤SUMO、MBP、TrxA、ACP標籤後,可溶性錶達的蛋白也分彆達到總樣本數的22％ (10/46)、26％(12/46)、26％(12/46)、22％ (10/46).結論 結覈分枝桿菌蛋白可溶性錶達快速通量篩選平檯的建立,實現瞭結覈分枝桿菌重組蛋白可溶性錶達的快速通量篩選,為更進一步研究結覈分枝桿菌蛋白、特彆是重要藥物靶標蛋白的結構與功能創造瞭條件.
목적 위료개변결핵분지간균단백질적결구여공능연구유우수결핵분지간균단백난이가용성표체화순화적영향이진전완만적문제.방법 장다개능촉진가용성표체적단백표첨여고통량적Gateway극륭기술상결합,구건결핵분지간균단백가용성표체쾌속통량적사선평태.도선46개불동분자량차이지이포함체형식표체혹자불표체적결핵분지간균단백적기인,분별극륭도대유N-말단적담원이용물질A(N utilization substance A,NusA)、소분자범소양수식단백(small ubiquitin-like modifier-1,SUMO)、맥아당결합단백(maltose-binding protein,MBP)、류양환단백(thioredoxin A,TrxA)、선기재체단백(acyl carrier protein,ACP)오충단백표첨기인적재체상,진행융합표체,분석비교각표첨촉진가용성표체적효과.결과 융합NusA표첨후,19개단백이가용성형식표체,점총양본적41％(19/46);동시융합SUMO、MBP、TrxA、ACP표첨후,가용성표체적단백야분별체도총양본수적22％ (10/46)、26％(12/46)、26％(12/46)、22％ (10/46).결론 결핵분지간균단백가용성표체쾌속통량사선평태적건립,실현료결핵분지간균중조단백가용성표체적쾌속통량사선,위경진일보연구결핵분지간균단백、특별시중요약물파표단백적결구여공능창조료조건.
