医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2015年
3期
143-149
,共7页
胡斌%孙鸣%李滨%刘家俊%沈关心
鬍斌%孫鳴%李濱%劉傢俊%瀋關心
호빈%손명%리빈%류가준%침관심
乙型肝炎病毒%腺相关病毒%靶向基因治疗
乙型肝炎病毒%腺相關病毒%靶嚮基因治療
을형간염병독%선상관병독%파향기인치료
HBV%AAV%targeting gene therapy
目的:构建和鉴定HBsAg靶向性的重组2型腺相关病毒( adeno?associated virus, AAV2)载体。方法运用噬菌体展示技术筛选特异性结合HBsAg的多肽,通过重组PCR技术将特异性多肽插入到2型腺相关病毒(AAV2)核衣壳蛋白的587位氨基酸处,构建靶向结合HBsAg的重组AAV2病毒。流式细胞术检测重组病毒感染HepG2?215细胞的特异性。结果筛选得到HBsAg特异性多肽,序列为SSYAPYVWQ?PIA。成功构建了携带靶向 HBsAg 多肽的重组 AAV2,命名为 rAAVssyU6?hrGFP。 rAAVssyU6?hrGFP 对HepG2、 HepG2?215细胞的感染率较AAV2明显升高,对HepG2?215细胞的感染率最高, HBsAb封闭实验明显降低rAAVssyU6?hrGFP病毒感染HepG2?215细胞的效率。结论 rAAVssyU6?hrGFP对HepG2?215细胞的感染具有特异性,有望成为介导siRNA分子有效治疗HBV的靶向载体。
目的:構建和鑒定HBsAg靶嚮性的重組2型腺相關病毒( adeno?associated virus, AAV2)載體。方法運用噬菌體展示技術篩選特異性結閤HBsAg的多肽,通過重組PCR技術將特異性多肽插入到2型腺相關病毒(AAV2)覈衣殼蛋白的587位氨基痠處,構建靶嚮結閤HBsAg的重組AAV2病毒。流式細胞術檢測重組病毒感染HepG2?215細胞的特異性。結果篩選得到HBsAg特異性多肽,序列為SSYAPYVWQ?PIA。成功構建瞭攜帶靶嚮 HBsAg 多肽的重組 AAV2,命名為 rAAVssyU6?hrGFP。 rAAVssyU6?hrGFP 對HepG2、 HepG2?215細胞的感染率較AAV2明顯升高,對HepG2?215細胞的感染率最高, HBsAb封閉實驗明顯降低rAAVssyU6?hrGFP病毒感染HepG2?215細胞的效率。結論 rAAVssyU6?hrGFP對HepG2?215細胞的感染具有特異性,有望成為介導siRNA分子有效治療HBV的靶嚮載體。
목적:구건화감정HBsAg파향성적중조2형선상관병독( adeno?associated virus, AAV2)재체。방법운용서균체전시기술사선특이성결합HBsAg적다태,통과중조PCR기술장특이성다태삽입도2형선상관병독(AAV2)핵의각단백적587위안기산처,구건파향결합HBsAg적중조AAV2병독。류식세포술검측중조병독감염HepG2?215세포적특이성。결과사선득도HBsAg특이성다태,서렬위SSYAPYVWQ?PIA。성공구건료휴대파향 HBsAg 다태적중조 AAV2,명명위 rAAVssyU6?hrGFP。 rAAVssyU6?hrGFP 대HepG2、 HepG2?215세포적감염솔교AAV2명현승고,대HepG2?215세포적감염솔최고, HBsAb봉폐실험명현강저rAAVssyU6?hrGFP병독감염HepG2?215세포적효솔。결론 rAAVssyU6?hrGFP대HepG2?215세포적감염구유특이성,유망성위개도siRNA분자유효치료HBV적파향재체。