激光生物学报
激光生物學報
격광생물학보
ACTA LASER BIOLOGY SINICA
2014年
4期
331-337
,共7页
孙源%刘见桥%杜红姿%曹善柏
孫源%劉見橋%杜紅姿%曹善柏
손원%류견교%두홍자%조선백
精子发生%Vad1.2%重组蛋白%多克隆抗体%小鼠
精子髮生%Vad1.2%重組蛋白%多剋隆抗體%小鼠
정자발생%Vad1.2%중조단백%다극륭항체%소서
spermatogenesis%Vad1.2%recombinant protein%polyclonal antibody%mice
目的:构建小鼠睾丸特异性基因Vad1.2重组蛋白,制备多克隆抗体.方法:将小鼠睾丸组织Vad1.2转录本行RT-PCR扩增,通过DNA重组技术插入克隆载体pET15b,进行酶切及DNA序列分析.将表达载体转化入大肠杆菌BL21(DE3) RIL感受态细胞,10 mmol/L IPTG诱导表达重组蛋白,通过10％ SDS-PAGE、Westernblotting及质谱分析进行鉴定.随后对重组Vad1.2蛋白进行纯化和进一步鉴定.最后,制备兔抗小鼠Vad1.2多克隆抗体,并通过Vad1.2-EGFP质粒转染GC-2spd(ts)细胞对其特异性进行验证.结果:大肠杆菌BL21(DE3) RIL细胞中诱导表达并纯化的小鼠Vad1.2重组蛋白构建正确并经Western blotting和质谱分析得到证实.所制备的多克隆抗体可特异性识别GC-2spd(ts)细胞中过表达的Vad1.2-EGFP融合蛋白.结论:成功构建小鼠Vad1.2重组蛋白,并制备多克隆抗体,为Vad1.2基因的进一步研究奠定了实验基础.
目的:構建小鼠睪汍特異性基因Vad1.2重組蛋白,製備多剋隆抗體.方法:將小鼠睪汍組織Vad1.2轉錄本行RT-PCR擴增,通過DNA重組技術插入剋隆載體pET15b,進行酶切及DNA序列分析.將錶達載體轉化入大腸桿菌BL21(DE3) RIL感受態細胞,10 mmol/L IPTG誘導錶達重組蛋白,通過10％ SDS-PAGE、Westernblotting及質譜分析進行鑒定.隨後對重組Vad1.2蛋白進行純化和進一步鑒定.最後,製備兔抗小鼠Vad1.2多剋隆抗體,併通過Vad1.2-EGFP質粒轉染GC-2spd(ts)細胞對其特異性進行驗證.結果:大腸桿菌BL21(DE3) RIL細胞中誘導錶達併純化的小鼠Vad1.2重組蛋白構建正確併經Western blotting和質譜分析得到證實.所製備的多剋隆抗體可特異性識彆GC-2spd(ts)細胞中過錶達的Vad1.2-EGFP融閤蛋白.結論:成功構建小鼠Vad1.2重組蛋白,併製備多剋隆抗體,為Vad1.2基因的進一步研究奠定瞭實驗基礎.
목적:구건소서고환특이성기인Vad1.2중조단백,제비다극륭항체.방법:장소서고환조직Vad1.2전록본행RT-PCR확증,통과DNA중조기술삽입극륭재체pET15b,진행매절급DNA서렬분석.장표체재체전화입대장간균BL21(DE3) RIL감수태세포,10 mmol/L IPTG유도표체중조단백,통과10％ SDS-PAGE、Westernblotting급질보분석진행감정.수후대중조Vad1.2단백진행순화화진일보감정.최후,제비토항소서Vad1.2다극륭항체,병통과Vad1.2-EGFP질립전염GC-2spd(ts)세포대기특이성진행험증.결과:대장간균BL21(DE3) RIL세포중유도표체병순화적소서Vad1.2중조단백구건정학병경Western blotting화질보분석득도증실.소제비적다극륭항체가특이성식별GC-2spd(ts)세포중과표체적Vad1.2-EGFP융합단백.결론:성공구건소서Vad1.2중조단백,병제비다극륭항체,위Vad1.2기인적진일보연구전정료실험기출.
