华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2015年
2期
176-179
,共4页
席进%陈月娟%张楠%张敬星%胡建国%吕合作
席進%陳月娟%張楠%張敬星%鬍建國%呂閤作
석진%진월연%장남%장경성%호건국%려합작
少突胶质细胞转录因子1%慢病毒表达载体%包装%聚合酶链反应%大鼠
少突膠質細胞轉錄因子1%慢病毒錶達載體%包裝%聚閤酶鏈反應%大鼠
소돌효질세포전록인자1%만병독표체재체%포장%취합매련반응%대서
oligodendrocyte transcription factor 1%lentiviral expression vector%package%polymerase chain reaction%rat
目的 构建大鼠少突胶质细胞转录因子1(Olig1)的慢病毒表达载体,并进行鉴定和包装.方法 采用聚合酶链反应(PCR),分别以大鼠pEGFP-N3-Olig1表达质粒和pDsRed-monomer-N1为模板,扩增获得大鼠Olig1片段和红色荧光蛋白(RFP)片段.将两者进行PCR拼接获得Olig1-RFP片段,并与pLenti6.3-MCS-DEST载体连接,构建获得pLenti6.3-Olig1-RFP慢病毒表达载体,并进行酶切鉴定、测序.然后,将其与包装质粒混合后共转染HEK293T细胞进行包装获得慢病毒颗粒.结果 通过酶切鉴定、测序,证明pLenti6.3-Olig1-RFP慢病毒表达载体构建成功,且能够被高效地包装为病毒颗粒.结论 成功建立大鼠pLenti6.3-Olig1-RFP慢病毒表达系统,为进一步研究Olig1的生物学作用提供了实验基础.
目的 構建大鼠少突膠質細胞轉錄因子1(Olig1)的慢病毒錶達載體,併進行鑒定和包裝.方法 採用聚閤酶鏈反應(PCR),分彆以大鼠pEGFP-N3-Olig1錶達質粒和pDsRed-monomer-N1為模闆,擴增穫得大鼠Olig1片段和紅色熒光蛋白(RFP)片段.將兩者進行PCR拼接穫得Olig1-RFP片段,併與pLenti6.3-MCS-DEST載體連接,構建穫得pLenti6.3-Olig1-RFP慢病毒錶達載體,併進行酶切鑒定、測序.然後,將其與包裝質粒混閤後共轉染HEK293T細胞進行包裝穫得慢病毒顆粒.結果 通過酶切鑒定、測序,證明pLenti6.3-Olig1-RFP慢病毒錶達載體構建成功,且能夠被高效地包裝為病毒顆粒.結論 成功建立大鼠pLenti6.3-Olig1-RFP慢病毒錶達繫統,為進一步研究Olig1的生物學作用提供瞭實驗基礎.
목적 구건대서소돌효질세포전록인자1(Olig1)적만병독표체재체,병진행감정화포장.방법 채용취합매련반응(PCR),분별이대서pEGFP-N3-Olig1표체질립화pDsRed-monomer-N1위모판,확증획득대서Olig1편단화홍색형광단백(RFP)편단.장량자진행PCR병접획득Olig1-RFP편단,병여pLenti6.3-MCS-DEST재체련접,구건획득pLenti6.3-Olig1-RFP만병독표체재체,병진행매절감정、측서.연후,장기여포장질립혼합후공전염HEK293T세포진행포장획득만병독과립.결과 통과매절감정、측서,증명pLenti6.3-Olig1-RFP만병독표체재체구건성공,차능구피고효지포장위병독과립.결론 성공건립대서pLenti6.3-Olig1-RFP만병독표체계통,위진일보연구Olig1적생물학작용제공료실험기출.
