华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2015年
2期
134-137
,共4页
颜畅%胡艺冰%穆磊%黄开禹%覃吉超
顏暢%鬍藝冰%穆磊%黃開禹%覃吉超
안창%호예빙%목뢰%황개우%담길초
Ki-67%结直肠癌%慢增殖%自我更新%肿瘤干细胞
Ki-67%結直腸癌%慢增殖%自我更新%腫瘤榦細胞
Ki-67%결직장암%만증식%자아경신%종류간세포
Ki-67%colorectal cancer%slow cycling%self-renewal%cancer stem cells
目的 观察结直肠癌中Ki-67阴性(Ki-67-/low)细胞在肿瘤增殖及自我更新(self-renew)中的作用,探讨将Ki-67-/low作为分离肿瘤干细胞标记物的应用.方法 通过将人结直肠癌标本消化成为单细胞,感染Ki-67启动子驱动GFP表达(pKi-67-GFP)的慢病毒后,注射至NOD/SCID小鼠背部建立pKi-67-GFP结直肠癌移植瘤模型;用流式细胞仪从移植瘤内分离出GFP+ EpCAM+细胞(Ki-67+癌上皮细胞)和GFP-/low EpCAM+细胞(Ki-67-/low癌上皮细胞),并采用免疫印迹验证Ki-67的表达;用流式细胞仪检测Ki-67-/low的细胞周期;采用PKH26标记细胞后,根据滞留细胞分析其在体内的增殖能力;采用荧光定量PCR(qPCR)研究Ki-67细胞中CD133、CD44和Lgr5等肿瘤干细胞相关基因的表达水平,并用成球实验研究Ki-67-/low结直肠癌细胞的自我更新能力.结果 从新鲜人结直肠癌移植瘤中分离出GFP+ EpCAM+细胞和GFP-/lowEpCAM+细胞,Western blot检测显示GFP+ EpCAM+细胞高表达Ki-67,GFP-/lowEpCAM+细胞不表达Ki-67;细胞周期检测显示,(82.25±3.16)％的Ki-67-/low细胞在G0/G1期,(51.67±4.11)％的Ki-67+细胞在G0/G1期,体内PKH26标记滞留实验显示Ki-67-/low和Ki-67+细胞分别含(81.53±5.85)％和(4.57±1.05)％ PKH26阳性细胞,差异有统计学意义(P＜0.01),提示Ki-67-/1ow细胞主要是G0/G1期细胞,在体内处于慢增殖状态;荧光定量PCR证明Ki-67-/low细胞CD133、CD44和Lgr5的mRNA水平为Ki-67+细胞的(3.47±0.79)、(6.18±1.65)和(4.67±1.15)倍,差异有统计学意义(P＜0.05),体外成球实验,Ki-67-/low及Ki-67+细胞的成球数量分别为(83.00±9.54)和(8.00±2.66) (P＜0.01),提示Ki-67-/low细胞高表达CD133、CD44和Lgr5等肿瘤干细胞相关标记物,并具有显著的自我更新能力,富集肿瘤干细胞.结论 Ki-67阴性的结直肠癌细胞具有慢增殖的特点,较Ki-67阳性结直肠癌细胞具有更强的成球能力,在结直肠癌的自我更新中起重要作用,并有可能作为肿瘤干细胞的标记物.
目的 觀察結直腸癌中Ki-67陰性(Ki-67-/low)細胞在腫瘤增殖及自我更新(self-renew)中的作用,探討將Ki-67-/low作為分離腫瘤榦細胞標記物的應用.方法 通過將人結直腸癌標本消化成為單細胞,感染Ki-67啟動子驅動GFP錶達(pKi-67-GFP)的慢病毒後,註射至NOD/SCID小鼠揹部建立pKi-67-GFP結直腸癌移植瘤模型;用流式細胞儀從移植瘤內分離齣GFP+ EpCAM+細胞(Ki-67+癌上皮細胞)和GFP-/low EpCAM+細胞(Ki-67-/low癌上皮細胞),併採用免疫印跡驗證Ki-67的錶達;用流式細胞儀檢測Ki-67-/low的細胞週期;採用PKH26標記細胞後,根據滯留細胞分析其在體內的增殖能力;採用熒光定量PCR(qPCR)研究Ki-67細胞中CD133、CD44和Lgr5等腫瘤榦細胞相關基因的錶達水平,併用成毬實驗研究Ki-67-/low結直腸癌細胞的自我更新能力.結果 從新鮮人結直腸癌移植瘤中分離齣GFP+ EpCAM+細胞和GFP-/lowEpCAM+細胞,Western blot檢測顯示GFP+ EpCAM+細胞高錶達Ki-67,GFP-/lowEpCAM+細胞不錶達Ki-67;細胞週期檢測顯示,(82.25±3.16)％的Ki-67-/low細胞在G0/G1期,(51.67±4.11)％的Ki-67+細胞在G0/G1期,體內PKH26標記滯留實驗顯示Ki-67-/low和Ki-67+細胞分彆含(81.53±5.85)％和(4.57±1.05)％ PKH26暘性細胞,差異有統計學意義(P＜0.01),提示Ki-67-/1ow細胞主要是G0/G1期細胞,在體內處于慢增殖狀態;熒光定量PCR證明Ki-67-/low細胞CD133、CD44和Lgr5的mRNA水平為Ki-67+細胞的(3.47±0.79)、(6.18±1.65)和(4.67±1.15)倍,差異有統計學意義(P＜0.05),體外成毬實驗,Ki-67-/low及Ki-67+細胞的成毬數量分彆為(83.00±9.54)和(8.00±2.66) (P＜0.01),提示Ki-67-/low細胞高錶達CD133、CD44和Lgr5等腫瘤榦細胞相關標記物,併具有顯著的自我更新能力,富集腫瘤榦細胞.結論 Ki-67陰性的結直腸癌細胞具有慢增殖的特點,較Ki-67暘性結直腸癌細胞具有更彊的成毬能力,在結直腸癌的自我更新中起重要作用,併有可能作為腫瘤榦細胞的標記物.
목적 관찰결직장암중Ki-67음성(Ki-67-/low)세포재종류증식급자아경신(self-renew)중적작용,탐토장Ki-67-/low작위분리종류간세포표기물적응용.방법 통과장인결직장암표본소화성위단세포,감염Ki-67계동자구동GFP표체(pKi-67-GFP)적만병독후,주사지NOD/SCID소서배부건립pKi-67-GFP결직장암이식류모형;용류식세포의종이식류내분리출GFP+ EpCAM+세포(Ki-67+암상피세포)화GFP-/low EpCAM+세포(Ki-67-/low암상피세포),병채용면역인적험증Ki-67적표체;용류식세포의검측Ki-67-/low적세포주기;채용PKH26표기세포후,근거체류세포분석기재체내적증식능력;채용형광정량PCR(qPCR)연구Ki-67세포중CD133、CD44화Lgr5등종류간세포상관기인적표체수평,병용성구실험연구Ki-67-/low결직장암세포적자아경신능력.결과 종신선인결직장암이식류중분리출GFP+ EpCAM+세포화GFP-/lowEpCAM+세포,Western blot검측현시GFP+ EpCAM+세포고표체Ki-67,GFP-/lowEpCAM+세포불표체Ki-67;세포주기검측현시,(82.25±3.16)％적Ki-67-/low세포재G0/G1기,(51.67±4.11)％적Ki-67+세포재G0/G1기,체내PKH26표기체류실험현시Ki-67-/low화Ki-67+세포분별함(81.53±5.85)％화(4.57±1.05)％ PKH26양성세포,차이유통계학의의(P＜0.01),제시Ki-67-/1ow세포주요시G0/G1기세포,재체내처우만증식상태;형광정량PCR증명Ki-67-/low세포CD133、CD44화Lgr5적mRNA수평위Ki-67+세포적(3.47±0.79)、(6.18±1.65)화(4.67±1.15)배,차이유통계학의의(P＜0.05),체외성구실험,Ki-67-/low급Ki-67+세포적성구수량분별위(83.00±9.54)화(8.00±2.66) (P＜0.01),제시Ki-67-/low세포고표체CD133、CD44화Lgr5등종류간세포상관표기물,병구유현저적자아경신능력,부집종류간세포.결론 Ki-67음성적결직장암세포구유만증식적특점,교Ki-67양성결직장암세포구유경강적성구능력,재결직장암적자아경신중기중요작용,병유가능작위종류간세포적표기물.
