华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2015年
2期
180-185
,共6页
原雅艺%党旭红%刘红艳%刘建功%左雅慧
原雅藝%黨旭紅%劉紅豔%劉建功%左雅慧
원아예%당욱홍%류홍염%류건공%좌아혜
Ran基因%过表达%RNA干扰%慢病毒载体
Ran基因%過錶達%RNA榦擾%慢病毒載體
Ran기인%과표체%RNA간우%만병독재체
Ran gene%overexpression%RNA interference%lentiviral vector
目的 构建基因组不稳定细胞Ran基因过表达和RNAi模型,为进一步研究该基因在辐射诱发基因组不稳定的功能提供研究工具.方法 根据Ran基因信息,以慢病毒载体GV218设计合成2种重组质粒,分别包含Ran基因全长序列以及阴性对照序列;以慢病毒载体GV248设计合成2重组质粒,分别包含Ran基因的小干扰序列以及用于干扰对照的阴性序列.利用Western blot和qPCR进行过表达和RNAi重组质粒表达的检测;通过转染293T细胞进行慢病毒的包装;利用qPCR和荧光法分别进行滴度的检测;再用包装好的慢病毒感染辐射诱导基因组不稳定性HL-7702肝细胞,利用qPCR检测Ran基因表达量.结果 测序结果表明重组质粒构建成功,并能够有效转染293T.过表达病毒滴度为2.0×108 TU/mL;RNAi病毒滴度为3.0×108 TU/mL.过表达慢病毒能有效地上调Ran基因的表达,过表达效率为85％.RNAi干扰慢病毒能够有效抑制Ran基因的表达,抑制效率为73％.结论 成功构建基因组不稳定肝细胞Ran基因过表达和RNAi模型,为进一步研究Ran基因在辐射诱发基因组不稳定细胞中的功能提供了有效的研究工具.
目的 構建基因組不穩定細胞Ran基因過錶達和RNAi模型,為進一步研究該基因在輻射誘髮基因組不穩定的功能提供研究工具.方法 根據Ran基因信息,以慢病毒載體GV218設計閤成2種重組質粒,分彆包含Ran基因全長序列以及陰性對照序列;以慢病毒載體GV248設計閤成2重組質粒,分彆包含Ran基因的小榦擾序列以及用于榦擾對照的陰性序列.利用Western blot和qPCR進行過錶達和RNAi重組質粒錶達的檢測;通過轉染293T細胞進行慢病毒的包裝;利用qPCR和熒光法分彆進行滴度的檢測;再用包裝好的慢病毒感染輻射誘導基因組不穩定性HL-7702肝細胞,利用qPCR檢測Ran基因錶達量.結果 測序結果錶明重組質粒構建成功,併能夠有效轉染293T.過錶達病毒滴度為2.0×108 TU/mL;RNAi病毒滴度為3.0×108 TU/mL.過錶達慢病毒能有效地上調Ran基因的錶達,過錶達效率為85％.RNAi榦擾慢病毒能夠有效抑製Ran基因的錶達,抑製效率為73％.結論 成功構建基因組不穩定肝細胞Ran基因過錶達和RNAi模型,為進一步研究Ran基因在輻射誘髮基因組不穩定細胞中的功能提供瞭有效的研究工具.
목적 구건기인조불은정세포Ran기인과표체화RNAi모형,위진일보연구해기인재복사유발기인조불은정적공능제공연구공구.방법 근거Ran기인신식,이만병독재체GV218설계합성2충중조질립,분별포함Ran기인전장서렬이급음성대조서렬;이만병독재체GV248설계합성2중조질립,분별포함Ran기인적소간우서렬이급용우간우대조적음성서렬.이용Western blot화qPCR진행과표체화RNAi중조질립표체적검측;통과전염293T세포진행만병독적포장;이용qPCR화형광법분별진행적도적검측;재용포장호적만병독감염복사유도기인조불은정성HL-7702간세포,이용qPCR검측Ran기인표체량.결과 측서결과표명중조질립구건성공,병능구유효전염293T.과표체병독적도위2.0×108 TU/mL;RNAi병독적도위3.0×108 TU/mL.과표체만병독능유효지상조Ran기인적표체,과표체효솔위85％.RNAi간우만병독능구유효억제Ran기인적표체,억제효솔위73％.결론 성공구건기인조불은정간세포Ran기인과표체화RNAi모형,위진일보연구Ran기인재복사유발기인조불은정세포중적공능제공료유효적연구공구.
