中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2015年
5期
432-436
,共5页
连孟洋%王昕%彭博%武伟华%刘慧%董方圆%丁小满%房师松%郑青
連孟洋%王昕%彭博%武偉華%劉慧%董方圓%丁小滿%房師鬆%鄭青
련맹양%왕흔%팽박%무위화%류혜%동방원%정소만%방사송%정청
RNA聚合酶Ⅰ%反向遗传学%绿色荧光蛋白%转染
RNA聚閤酶Ⅰ%反嚮遺傳學%綠色熒光蛋白%轉染
RNA취합매Ⅰ%반향유전학%록색형광단백%전염
RNA polymerase Ⅰ%reverse genetics%enhanced green fluorescent protein%transfection
目的 构建依赖辅助病毒和宿主细胞内合成病毒核糖核蛋白复合体(vRNPs)的反向遗传学系统,利用上述两系统表达绿色荧光蛋白(EGFP).方法 将EGFP cDNA精确插入人RNA聚合酶Ⅰ启动子和小鼠终止子序列之间,构建RNAPOLI系统,此系统被克隆入pBluescript Ⅱ sk(+),获得重组质粒pBluescript Ⅱ sk(+)tI-EGFP-PIh;基于辅助病毒H1N1,pBluescript Ⅱ sk(+)-tI-EGFP-PIh转染MDCK细胞,观察荧光.来源于甲型流感病毒H1N1分离株A/Puerto Rico/8/34的PB2、PB1、PA、NP 4个基因片段cDNA克隆入载体pcDNA3.1(+),获得pcDNA3.1-PB2、pcDNA3.1-PB1、pcDNA3.1-PA、pcDNA3.1-NP,将pBluescript Ⅱ sk(+)-tI-EGFP-PIh与4个表达质粒共转染293T细胞,观察荧光.结果 所构建的载体均经菌液PCR及测序验证正确;两种转染体系均可观察到绿色荧光.结论 所构建的依赖辅助病毒和宿主细胞内合成vRNPs的反向遗传学系统均可使绿色荧光蛋白表达.
目的 構建依賴輔助病毒和宿主細胞內閤成病毒覈糖覈蛋白複閤體(vRNPs)的反嚮遺傳學繫統,利用上述兩繫統錶達綠色熒光蛋白(EGFP).方法 將EGFP cDNA精確插入人RNA聚閤酶Ⅰ啟動子和小鼠終止子序列之間,構建RNAPOLI繫統,此繫統被剋隆入pBluescript Ⅱ sk(+),穫得重組質粒pBluescript Ⅱ sk(+)tI-EGFP-PIh;基于輔助病毒H1N1,pBluescript Ⅱ sk(+)-tI-EGFP-PIh轉染MDCK細胞,觀察熒光.來源于甲型流感病毒H1N1分離株A/Puerto Rico/8/34的PB2、PB1、PA、NP 4箇基因片段cDNA剋隆入載體pcDNA3.1(+),穫得pcDNA3.1-PB2、pcDNA3.1-PB1、pcDNA3.1-PA、pcDNA3.1-NP,將pBluescript Ⅱ sk(+)-tI-EGFP-PIh與4箇錶達質粒共轉染293T細胞,觀察熒光.結果 所構建的載體均經菌液PCR及測序驗證正確;兩種轉染體繫均可觀察到綠色熒光.結論 所構建的依賴輔助病毒和宿主細胞內閤成vRNPs的反嚮遺傳學繫統均可使綠色熒光蛋白錶達.
목적 구건의뢰보조병독화숙주세포내합성병독핵당핵단백복합체(vRNPs)적반향유전학계통,이용상술량계통표체록색형광단백(EGFP).방법 장EGFP cDNA정학삽입인RNA취합매Ⅰ계동자화소서종지자서렬지간,구건RNAPOLI계통,차계통피극륭입pBluescript Ⅱ sk(+),획득중조질립pBluescript Ⅱ sk(+)tI-EGFP-PIh;기우보조병독H1N1,pBluescript Ⅱ sk(+)-tI-EGFP-PIh전염MDCK세포,관찰형광.래원우갑형류감병독H1N1분리주A/Puerto Rico/8/34적PB2、PB1、PA、NP 4개기인편단cDNA극륭입재체pcDNA3.1(+),획득pcDNA3.1-PB2、pcDNA3.1-PB1、pcDNA3.1-PA、pcDNA3.1-NP,장pBluescript Ⅱ sk(+)-tI-EGFP-PIh여4개표체질립공전염293T세포,관찰형광.결과 소구건적재체균경균액PCR급측서험증정학;량충전염체계균가관찰도록색형광.결론 소구건적의뢰보조병독화숙주세포내합성vRNPs적반향유전학계통균가사록색형광단백표체.
