中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2015年
5期
399-402
,共4页
樊华%国九英%马素丽%张楠%安春丽
樊華%國九英%馬素麗%張楠%安春麗
번화%국구영%마소려%장남%안춘려
肺孢子菌%p55抗原%串联抗原基因%真核表达
肺孢子菌%p55抗原%串聯抗原基因%真覈錶達
폐포자균%p55항원%천련항원기인%진핵표체
Pneumocystis carinii%p55 antigen%tandem antigen gene%eukaryotic cell expression
目的 研究肺孢子菌p55抗原人工合成串联基因的真核表达载体构建及其表达鉴定.方法 从肺孢子菌p55蛋白5个变异体中选取可能在肺孢子菌肺炎中起重要作用抗原表位,串联合成一段多表位基因,命名为TAG.将TAG双酶切后克隆到pIRES hrGFP-1a真核表达载体,构建重组质粒pIRES-hrGFP-1a/TAG,将重组质粒转染至感受态TG-1大肠杆菌中进行扩增后,经提取纯化质粒再转染至HEK293细胞,用Western blot鉴定蛋白表达水平.结果 构建的pIRES-hrGFP-1a/TAG重组质粒经酶切后测序鉴定,证明其序列正确,成功转染至HEK293细胞,Western blot检测其在HKE293细胞中能进行有效基因表达.结论 本研究构建了pIRES-hrGFP-1a/TAG重组质粒,并在HEK293细胞中成功表达,为进一步阐明TAG的免疫保护功能以及核酸疫苗的研究奠定基础.
目的 研究肺孢子菌p55抗原人工閤成串聯基因的真覈錶達載體構建及其錶達鑒定.方法 從肺孢子菌p55蛋白5箇變異體中選取可能在肺孢子菌肺炎中起重要作用抗原錶位,串聯閤成一段多錶位基因,命名為TAG.將TAG雙酶切後剋隆到pIRES hrGFP-1a真覈錶達載體,構建重組質粒pIRES-hrGFP-1a/TAG,將重組質粒轉染至感受態TG-1大腸桿菌中進行擴增後,經提取純化質粒再轉染至HEK293細胞,用Western blot鑒定蛋白錶達水平.結果 構建的pIRES-hrGFP-1a/TAG重組質粒經酶切後測序鑒定,證明其序列正確,成功轉染至HEK293細胞,Western blot檢測其在HKE293細胞中能進行有效基因錶達.結論 本研究構建瞭pIRES-hrGFP-1a/TAG重組質粒,併在HEK293細胞中成功錶達,為進一步闡明TAG的免疫保護功能以及覈痠疫苗的研究奠定基礎.
목적 연구폐포자균p55항원인공합성천련기인적진핵표체재체구건급기표체감정.방법 종폐포자균p55단백5개변이체중선취가능재폐포자균폐염중기중요작용항원표위,천연합성일단다표위기인,명명위TAG.장TAG쌍매절후극륭도pIRES hrGFP-1a진핵표체재체,구건중조질립pIRES-hrGFP-1a/TAG,장중조질립전염지감수태TG-1대장간균중진행확증후,경제취순화질립재전염지HEK293세포,용Western blot감정단백표체수평.결과 구건적pIRES-hrGFP-1a/TAG중조질립경매절후측서감정,증명기서렬정학,성공전염지HEK293세포,Western blot검측기재HKE293세포중능진행유효기인표체.결론 본연구구건료pIRES-hrGFP-1a/TAG중조질립,병재HEK293세포중성공표체,위진일보천명TAG적면역보호공능이급핵산역묘적연구전정기출.
