微生物学免疫学进展
微生物學免疫學進展
미생물학면역학진전
PROGRESS IN MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2015年
3期
21-25
,共5页
傅生芳%朱传凤%姜英%安静%余黎%周旭
傅生芳%硃傳鳳%薑英%安靜%餘黎%週旭
부생방%주전봉%강영%안정%여려%주욱
呼吸道合胞病毒截断短F1蛋白%包涵体%纯化%复性
呼吸道閤胞病毒截斷短F1蛋白%包涵體%純化%複性
호흡도합포병독절단단F1단백%포함체%순화%복성
目的 将前期在大肠埃希杆菌中获得表达的A型人呼吸道合胞病毒兰州分离株截短的F1重组蛋白进行纯化和复性,为后期动物免疫制备抗原.方法 37℃诱导重组菌体pET-42b-F1J/Rossata,诱导完毕后离心收集菌体,高压破碎菌体并收集包涵体后用不同浓度的TritonX-100(细胞裂解液)洗涤包涵体3次.洗涤的包涵体用8 mol/L尿素进行溶解并用镍离子亲和层析方法进行初步纯化,用阳离子交换层析方法对初步纯化蛋白进行最终的纯化.亲和层析纯化蛋白用3种不同的复性液进行了稀释复性.结果 37℃诱导5 000 mL重组菌pET-42b-F1J/Rossata共收获37 g湿菌体,经过不同浓度TritonX-100洗涤包涵体后纯度可达75％.包涵体用8 mol/L尿素溶解后经镍离子亲和层析纯化纯度约为40％,再用阳离子交换层析介质SP HP进一步纯化样品后纯度可达90％.纯化蛋白以3种不同的复性液都能得到复性,其中复性液3的复性效果相对较好.结论 实验中探索了人呼吸道合胞病毒截短F1重组蛋白包涵体的纯化方法及步骤,为后期的蛋白制备及动物免疫奠定了基础.
目的 將前期在大腸埃希桿菌中穫得錶達的A型人呼吸道閤胞病毒蘭州分離株截短的F1重組蛋白進行純化和複性,為後期動物免疫製備抗原.方法 37℃誘導重組菌體pET-42b-F1J/Rossata,誘導完畢後離心收集菌體,高壓破碎菌體併收集包涵體後用不同濃度的TritonX-100(細胞裂解液)洗滌包涵體3次.洗滌的包涵體用8 mol/L尿素進行溶解併用鎳離子親和層析方法進行初步純化,用暘離子交換層析方法對初步純化蛋白進行最終的純化.親和層析純化蛋白用3種不同的複性液進行瞭稀釋複性.結果 37℃誘導5 000 mL重組菌pET-42b-F1J/Rossata共收穫37 g濕菌體,經過不同濃度TritonX-100洗滌包涵體後純度可達75％.包涵體用8 mol/L尿素溶解後經鎳離子親和層析純化純度約為40％,再用暘離子交換層析介質SP HP進一步純化樣品後純度可達90％.純化蛋白以3種不同的複性液都能得到複性,其中複性液3的複性效果相對較好.結論 實驗中探索瞭人呼吸道閤胞病毒截短F1重組蛋白包涵體的純化方法及步驟,為後期的蛋白製備及動物免疫奠定瞭基礎.
목적 장전기재대장애희간균중획득표체적A형인호흡도합포병독란주분리주절단적F1중조단백진행순화화복성,위후기동물면역제비항원.방법 37℃유도중조균체pET-42b-F1J/Rossata,유도완필후리심수집균체,고압파쇄균체병수집포함체후용불동농도적TritonX-100(세포렬해액)세조포함체3차.세조적포함체용8 mol/L뇨소진행용해병용얼리자친화층석방법진행초보순화,용양리자교환층석방법대초보순화단백진행최종적순화.친화층석순화단백용3충불동적복성액진행료희석복성.결과 37℃유도5 000 mL중조균pET-42b-F1J/Rossata공수획37 g습균체,경과불동농도TritonX-100세조포함체후순도가체75％.포함체용8 mol/L뇨소용해후경얼리자친화층석순화순도약위40％,재용양리자교환층석개질SP HP진일보순화양품후순도가체90％.순화단백이3충불동적복성액도능득도복성,기중복성액3적복성효과상대교호.결론 실험중탐색료인호흡도합포병독절단F1중조단백포함체적순화방법급보취,위후기적단백제비급동물면역전정료기출.
