黑龙江动物繁殖
黑龍江動物繁殖
흑룡강동물번식
2015年
3期
6-9,12
,共5页
王皓%孙宏瑶%侯坤%朴善花%安铁洙%王春生
王皓%孫宏瑤%侯坤%樸善花%安鐵洙%王春生
왕호%손굉요%후곤%박선화%안철수%왕춘생
microRNA%miR-16%载体构建%表达检测
microRNA%miR-16%載體構建%錶達檢測
microRNA%miR-16%재체구건%표체검측
为了探明miR16在体细胞重编程过程中的作用机制,构建小鼠miR-16逆转录病毒载体.根据NCBI上小鼠miR16的相关序列,从小鼠基因组中扩增miR-16核心序列并将其连接到pMD18-simple载体,对重组质粒进行双酶切回收目的片段.将目的片段与pMXs逆转录病毒载体连接,经过酶切、PCR和测序鉴定,最终构建逆转录病毒载体miR16-pMXs;采用脂质体法将miR16-pMXs转染plat-E细胞,以包装逆转录病毒颗粒;用逆转录病毒颗粒侵染小鼠胚胎成纤维细胞,在侵染后的第5天,提取被侵染细胞的总RNA,反转录后获得cDNA,并采用qPCR方法检测侵染前后细胞中miR-16的相对表达量.结果显示,被逆转录病毒侵染后,小鼠成纤维细胞中miR-16的相对表达量比侵染前约提高1 460倍.结论:成功构建具有表达活性的microRNA 16逆转录病毒载体,为进一步开展miR-16在细胞重编程中的作用机制的相关研究提供了依据.
為瞭探明miR16在體細胞重編程過程中的作用機製,構建小鼠miR-16逆轉錄病毒載體.根據NCBI上小鼠miR16的相關序列,從小鼠基因組中擴增miR-16覈心序列併將其連接到pMD18-simple載體,對重組質粒進行雙酶切迴收目的片段.將目的片段與pMXs逆轉錄病毒載體連接,經過酶切、PCR和測序鑒定,最終構建逆轉錄病毒載體miR16-pMXs;採用脂質體法將miR16-pMXs轉染plat-E細胞,以包裝逆轉錄病毒顆粒;用逆轉錄病毒顆粒侵染小鼠胚胎成纖維細胞,在侵染後的第5天,提取被侵染細胞的總RNA,反轉錄後穫得cDNA,併採用qPCR方法檢測侵染前後細胞中miR-16的相對錶達量.結果顯示,被逆轉錄病毒侵染後,小鼠成纖維細胞中miR-16的相對錶達量比侵染前約提高1 460倍.結論:成功構建具有錶達活性的microRNA 16逆轉錄病毒載體,為進一步開展miR-16在細胞重編程中的作用機製的相關研究提供瞭依據.
위료탐명miR16재체세포중편정과정중적작용궤제,구건소서miR-16역전록병독재체.근거NCBI상소서miR16적상관서렬,종소서기인조중확증miR-16핵심서렬병장기련접도pMD18-simple재체,대중조질립진행쌍매절회수목적편단.장목적편단여pMXs역전록병독재체련접,경과매절、PCR화측서감정,최종구건역전록병독재체miR16-pMXs;채용지질체법장miR16-pMXs전염plat-E세포,이포장역전록병독과립;용역전록병독과립침염소서배태성섬유세포,재침염후적제5천,제취피침염세포적총RNA,반전록후획득cDNA,병채용qPCR방법검측침염전후세포중miR-16적상대표체량.결과현시,피역전록병독침염후,소서성섬유세포중miR-16적상대표체량비침염전약제고1 460배.결론:성공구건구유표체활성적microRNA 16역전록병독재체,위진일보개전miR-16재세포중편정중적작용궤제적상관연구제공료의거.
