西北植物学报
西北植物學報
서북식물학보
ACTA BOTANICA BOREALI-OCCIDENTALIA SINICA
2015年
5期
890-897
,共8页
张冬敏%田奇琳%杨曼曼%林玉玲%赖钟雄
張鼕敏%田奇琳%楊曼曼%林玉玲%賴鐘雄
장동민%전기림%양만만%림옥령%뢰종웅
龙眼%体细胞胚胎发生%WUSCHEL%实时荧光定量PCR
龍眼%體細胞胚胎髮生%WUSCHEL%實時熒光定量PCR
용안%체세포배태발생%WUSCHEL%실시형광정량PCR
longan%somatic embryogenesis%WUSCHEL%real-time quantitative PCR
以龙眼‘红核子’LCc悬浮细胞系诱导的胚性愈伤组织为基本材料,按照龙眼体细胞胚胎同步化方法诱导获得龙眼体胚不同阶段材料,并以龙眼体细胞胚胎发生不同阶段混合材料作为试验材料,采用RT PCR结合RACE技术分离并克隆龙眼中编码同源异型结构域蛋白的转录因子WUSCHEL(简称DlWUS)的cDNA全长及DNA序列,并进行序列分析与表达分析.结果表明:DlWUS的cDNA全长1 110 bp,开放阅读框(ORF)858 bp,共编码285个氨基酸(GenBank登录号为KM017506),DlWUS的DNA包含2个内含子.序列分析表明,DlWUS是一个不稳定的亲水蛋白,不含信号肽,亚细胞定位于细胞核,具跨膜结构和Homeodomain超级家族的保守结构域以及WUS转录因子家族特有的WUS box和EAR-like结构域,推测该目的基因确实为WUS转录因子.系统进化分析显示,龙眼DlWUS与脐橙WUS归为一个分支,亲缘关系较近.实时荧光定量PCR分析结果表明,在龙眼体细胞胚胎发生整个过程中,DlWUS均有表达,但仅在球形胚时期表达量较高,说明DlWUS可能主要在球形胚阶段发挥作用,并且在一定浓度范围内,外源施加IAA和GA3能够促进DlWUS基因的表达,而外源施加SA则抑制DlWUS基因的表达.
以龍眼‘紅覈子’LCc懸浮細胞繫誘導的胚性愈傷組織為基本材料,按照龍眼體細胞胚胎同步化方法誘導穫得龍眼體胚不同階段材料,併以龍眼體細胞胚胎髮生不同階段混閤材料作為試驗材料,採用RT PCR結閤RACE技術分離併剋隆龍眼中編碼同源異型結構域蛋白的轉錄因子WUSCHEL(簡稱DlWUS)的cDNA全長及DNA序列,併進行序列分析與錶達分析.結果錶明:DlWUS的cDNA全長1 110 bp,開放閱讀框(ORF)858 bp,共編碼285箇氨基痠(GenBank登錄號為KM017506),DlWUS的DNA包含2箇內含子.序列分析錶明,DlWUS是一箇不穩定的親水蛋白,不含信號肽,亞細胞定位于細胞覈,具跨膜結構和Homeodomain超級傢族的保守結構域以及WUS轉錄因子傢族特有的WUS box和EAR-like結構域,推測該目的基因確實為WUS轉錄因子.繫統進化分析顯示,龍眼DlWUS與臍橙WUS歸為一箇分支,親緣關繫較近.實時熒光定量PCR分析結果錶明,在龍眼體細胞胚胎髮生整箇過程中,DlWUS均有錶達,但僅在毬形胚時期錶達量較高,說明DlWUS可能主要在毬形胚階段髮揮作用,併且在一定濃度範圍內,外源施加IAA和GA3能夠促進DlWUS基因的錶達,而外源施加SA則抑製DlWUS基因的錶達.
이용안‘홍핵자’LCc현부세포계유도적배성유상조직위기본재료,안조용안체세포배태동보화방법유도획득용안체배불동계단재료,병이용안체세포배태발생불동계단혼합재료작위시험재료,채용RT PCR결합RACE기술분리병극륭용안중편마동원이형결구역단백적전록인자WUSCHEL(간칭DlWUS)적cDNA전장급DNA서렬,병진행서렬분석여표체분석.결과표명:DlWUS적cDNA전장1 110 bp,개방열독광(ORF)858 bp,공편마285개안기산(GenBank등록호위KM017506),DlWUS적DNA포함2개내함자.서렬분석표명,DlWUS시일개불은정적친수단백,불함신호태,아세포정위우세포핵,구과막결구화Homeodomain초급가족적보수결구역이급WUS전록인자가족특유적WUS box화EAR-like결구역,추측해목적기인학실위WUS전록인자.계통진화분석현시,용안DlWUS여제등WUS귀위일개분지,친연관계교근.실시형광정량PCR분석결과표명,재용안체세포배태발생정개과정중,DlWUS균유표체,단부재구형배시기표체량교고,설명DlWUS가능주요재구형배계단발휘작용,병차재일정농도범위내,외원시가IAA화GA3능구촉진DlWUS기인적표체,이외원시가SA칙억제DlWUS기인적표체.
