西北植物学报
西北植物學報
서북식물학보
ACTA BOTANICA BOREALI-OCCIDENTALIA SINICA
2015年
5期
884-889
,共6页
李蒙%陈芳霞%吕宁%陈鹏
李矇%陳芳霞%呂寧%陳鵬
리몽%진방하%려저%진붕
苦荞%二氢黄酮醇4-还原酶%原核表达%多克隆抗体
苦蕎%二氫黃酮醇4-還原酶%原覈錶達%多剋隆抗體
고교%이경황동순4-환원매%원핵표체%다극륭항체
tartary buckwheat%DFR%prokaryotic expression%polyclonal antibody
苦荞二氢黄酮醇4-还原酶(DFR)是花青素合成途径的关键酶.该研究以苦荞种子灌浆期cDNA为模板,采用RT-PCR方法克隆苦荞DFR编码基因,并将其连接到表达载体pET47b上,转化获得苦荞DFR编码基因的大肠杆菌BL21 (DE3)工程菌,通过IPTG诱导表达,用SDS-PAGE分析表达产物,用亲和层析方法纯化蛋白,制备苦荞DFR多克隆抗体.RT PCR技术获得了苦荞DFR编码基因的开放阅读框,重组表达载体经PCR和测序鉴定,表明表达载体构建成功,SDS-PAGE分析表达产物分别以可溶和不可溶的形式高效表达,亲和层析纯化得到融合蛋白,Western blotting显示,制备的多克隆抗体能特异识别其对应的抗原,天然的苦荞DFR蛋白在苦荞种子灌浆期中大量表达.苦荞DFR编码基因的原核表达与多克隆抗体的制备,为进一步开展DFR编码基因功能的研究奠定了基础.
苦蕎二氫黃酮醇4-還原酶(DFR)是花青素閤成途徑的關鍵酶.該研究以苦蕎種子灌漿期cDNA為模闆,採用RT-PCR方法剋隆苦蕎DFR編碼基因,併將其連接到錶達載體pET47b上,轉化穫得苦蕎DFR編碼基因的大腸桿菌BL21 (DE3)工程菌,通過IPTG誘導錶達,用SDS-PAGE分析錶達產物,用親和層析方法純化蛋白,製備苦蕎DFR多剋隆抗體.RT PCR技術穫得瞭苦蕎DFR編碼基因的開放閱讀框,重組錶達載體經PCR和測序鑒定,錶明錶達載體構建成功,SDS-PAGE分析錶達產物分彆以可溶和不可溶的形式高效錶達,親和層析純化得到融閤蛋白,Western blotting顯示,製備的多剋隆抗體能特異識彆其對應的抗原,天然的苦蕎DFR蛋白在苦蕎種子灌漿期中大量錶達.苦蕎DFR編碼基因的原覈錶達與多剋隆抗體的製備,為進一步開展DFR編碼基因功能的研究奠定瞭基礎.
고교이경황동순4-환원매(DFR)시화청소합성도경적관건매.해연구이고교충자관장기cDNA위모판,채용RT-PCR방법극륭고교DFR편마기인,병장기련접도표체재체pET47b상,전화획득고교DFR편마기인적대장간균BL21 (DE3)공정균,통과IPTG유도표체,용SDS-PAGE분석표체산물,용친화층석방법순화단백,제비고교DFR다극륭항체.RT PCR기술획득료고교DFR편마기인적개방열독광,중조표체재체경PCR화측서감정,표명표체재체구건성공,SDS-PAGE분석표체산물분별이가용화불가용적형식고효표체,친화층석순화득도융합단백,Western blotting현시,제비적다극륭항체능특이식별기대응적항원,천연적고교DFR단백재고교충자관장기중대량표체.고교DFR편마기인적원핵표체여다극륭항체적제비,위진일보개전DFR편마기인공능적연구전정료기출.
