北京农学院学报
北京農學院學報
북경농학원학보
JOURNAL OF BEIJING AGRICULTURAL COLLEGE
2015年
3期
48-51
,共4页
杨红杰%于长青%林树伯%于红欣%周双海%李继良
楊紅傑%于長青%林樹伯%于紅訢%週雙海%李繼良
양홍걸%우장청%림수백%우홍흔%주쌍해%리계량
伪狂犬病病毒%gB基因%荧光定量PCR%SYBR Green Ⅰ%疫苗剂量
偽狂犬病病毒%gB基因%熒光定量PCR%SYBR Green Ⅰ%疫苗劑量
위광견병병독%gB기인%형광정량PCR%SYBR Green Ⅰ%역묘제량
pseudorabies virus%gB gene%fluorescent quantitative PCR%SYBR Green Ⅰ%vaccine dose
用PCR方法扩增伪狂犬病病毒(PRV)的gB基因片段,构建含有gB基因片段的重组质粒,以不同浓度的PRV-gB基因重组质粒为模板应用SYBR Green Ⅰ方法来建立检测PRV-gB基因载量的荧光定量PCR方法.结果显示:在(8.6×107～8.6×101) copies/μL范围内,回归方程为y=-3.5604x+41.165,其决定系数为0.9993,显示出优良的线性关系;扩增产物的熔解曲线仅有一个特异性单峰.该方法对猪圆环病毒、猪细小病毒、猪细环病毒等常见猪源DNA病毒进行检测时均没有扩增曲线,重复性试验的变异系数小于2％,表明建立了特异性强、重复性好、灵敏性高的PRV-gB基因SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法.用该方法检测8种商品伪狂犬病弱毒活疫苗的每头份剂量的病毒载量,结果显示不同商品伪狂犬病弱毒活疫苗之间的病毒载量存在明显差异,与其标识剂量基本一致,表明该荧光定量PCR检测方法可用于疫苗剂量检测.
用PCR方法擴增偽狂犬病病毒(PRV)的gB基因片段,構建含有gB基因片段的重組質粒,以不同濃度的PRV-gB基因重組質粒為模闆應用SYBR Green Ⅰ方法來建立檢測PRV-gB基因載量的熒光定量PCR方法.結果顯示:在(8.6×107～8.6×101) copies/μL範圍內,迴歸方程為y=-3.5604x+41.165,其決定繫數為0.9993,顯示齣優良的線性關繫;擴增產物的鎔解麯線僅有一箇特異性單峰.該方法對豬圓環病毒、豬細小病毒、豬細環病毒等常見豬源DNA病毒進行檢測時均沒有擴增麯線,重複性試驗的變異繫數小于2％,錶明建立瞭特異性彊、重複性好、靈敏性高的PRV-gB基因SYBR Green Ⅰ熒光定量PCR檢測方法.用該方法檢測8種商品偽狂犬病弱毒活疫苗的每頭份劑量的病毒載量,結果顯示不同商品偽狂犬病弱毒活疫苗之間的病毒載量存在明顯差異,與其標識劑量基本一緻,錶明該熒光定量PCR檢測方法可用于疫苗劑量檢測.
용PCR방법확증위광견병병독(PRV)적gB기인편단,구건함유gB기인편단적중조질립,이불동농도적PRV-gB기인중조질립위모판응용SYBR Green Ⅰ방법래건립검측PRV-gB기인재량적형광정량PCR방법.결과현시:재(8.6×107～8.6×101) copies/μL범위내,회귀방정위y=-3.5604x+41.165,기결정계수위0.9993,현시출우량적선성관계;확증산물적용해곡선부유일개특이성단봉.해방법대저원배병독、저세소병독、저세배병독등상견저원DNA병독진행검측시균몰유확증곡선,중복성시험적변이계수소우2％,표명건립료특이성강、중복성호、령민성고적PRV-gB기인SYBR Green Ⅰ형광정량PCR검측방법.용해방법검측8충상품위광견병약독활역묘적매두빈제량적병독재량,결과현시불동상품위광견병약독활역묘지간적병독재량존재명현차이,여기표식제량기본일치,표명해형광정량PCR검측방법가용우역묘제량검측.
