北京农学院学报
北京農學院學報
북경농학원학보
JOURNAL OF BEIJING AGRICULTURAL COLLEGE
2015年
3期
44-47
,共4页
于长青%林树伯%刘乐荣%王庆博%李继良
于長青%林樹伯%劉樂榮%王慶博%李繼良
우장청%림수백%류악영%왕경박%리계량
猪流行性腹泻病毒%SYBR Green Ⅰ%荧光定量PCR%早期快速诊断
豬流行性腹瀉病毒%SYBR Green Ⅰ%熒光定量PCR%早期快速診斷
저류행성복사병독%SYBR Green Ⅰ%형광정량PCR%조기쾌속진단
PEDV%SYBR Green Ⅰ%fluorescent quantitative PCR%early and quick diagnosis
用RT-PCR方法扩增猪流行性腹泻病毒(PEDV)的M基因片段,并克隆到PUC-T载体中,构建含有PEDV M基因片段的重组质粒.以系列稀释后的重组质粒为模板,基于SYBR Green Ⅰ进行PEDV检测的实时荧光定量PCR扩增.结果显示,扩增效率为100.4％,相邻扩增曲线之间间距均匀,所有产物的熔解曲线具有单一整齐的峰,标准曲线具有优良的线性关系,最低可准确检测520拷贝/μL的核酸模板,重复性试验的变异系数小于3％.用所建立方法对3种常见猪源RNA病毒的检测结果均为阴性,对临床样品的检出率显著(P＜0.05)高于常规PCR方法.研究结果表明,建立了一种灵敏度高、特异性强、重复性好的检测PEDV的SYBRGreen Ⅰ实时荧光定量PCR方法,可用于PEDV的定量检测和猪流行性腹泻的早期快速诊断.
用RT-PCR方法擴增豬流行性腹瀉病毒(PEDV)的M基因片段,併剋隆到PUC-T載體中,構建含有PEDV M基因片段的重組質粒.以繫列稀釋後的重組質粒為模闆,基于SYBR Green Ⅰ進行PEDV檢測的實時熒光定量PCR擴增.結果顯示,擴增效率為100.4％,相鄰擴增麯線之間間距均勻,所有產物的鎔解麯線具有單一整齊的峰,標準麯線具有優良的線性關繫,最低可準確檢測520拷貝/μL的覈痠模闆,重複性試驗的變異繫數小于3％.用所建立方法對3種常見豬源RNA病毒的檢測結果均為陰性,對臨床樣品的檢齣率顯著(P＜0.05)高于常規PCR方法.研究結果錶明,建立瞭一種靈敏度高、特異性彊、重複性好的檢測PEDV的SYBRGreen Ⅰ實時熒光定量PCR方法,可用于PEDV的定量檢測和豬流行性腹瀉的早期快速診斷.
용RT-PCR방법확증저류행성복사병독(PEDV)적M기인편단,병극륭도PUC-T재체중,구건함유PEDV M기인편단적중조질립.이계렬희석후적중조질립위모판,기우SYBR Green Ⅰ진행PEDV검측적실시형광정량PCR확증.결과현시,확증효솔위100.4％,상린확증곡선지간간거균균,소유산물적용해곡선구유단일정제적봉,표준곡선구유우량적선성관계,최저가준학검측520고패/μL적핵산모판,중복성시험적변이계수소우3％.용소건립방법대3충상견저원RNA병독적검측결과균위음성,대림상양품적검출솔현저(P＜0.05)고우상규PCR방법.연구결과표명,건립료일충령민도고、특이성강、중복성호적검측PEDV적SYBRGreen Ⅰ실시형광정량PCR방법,가용우PEDV적정량검측화저류행성복사적조기쾌속진단.
