湖北农业科学
湖北農業科學
호북농업과학
2015年
7期
1648-1651,1654
,共5页
FoxA3%Hnf4α%大鼠肝细胞%细胞增殖
FoxA3%Hnf4α%大鼠肝細胞%細胞增殖
FoxA3%Hnf4α%대서간세포%세포증식
FoxA3%Hnf4α%rat hepatocytes%cell proliferation
为研究FoxA3和Hnf4α组合对原代大鼠肝细胞体外增殖的作用,构建了FoxA3和Hnf4α基因的慢病毒载体,共转染体外培养的原代大鼠肝细胞;倒置荧光显微镜下观察转染细胞是否增殖;反转录PCR(Reverse transcription PCR,RT-PCR)检测外源基因和肝细胞特异基因的表达情况;PAS (Periodic acidschiff)染色和吲哚菁绿(Indocyanine green,ICG)摄取检测转染细胞功能.结果表明,慢病毒转染4d后表达绿色荧光蛋白的部分肝细胞呈现上皮样形态并增殖成簇,与正常培养的肝细胞相比增殖能力明显增强;PCR分析表明增殖的肝细胞除表达外源FoxA3和Hnf4α外,还表达肝细胞的标志基因Alb、CK18和G6p;功能检测结果表明增殖的肝细胞具有成熟肝细胞糖原合成和吲哚菁绿摄取的能力.以上结果表明,FoxA3和Hf4α能促使体外培养的原代大鼠肝细胞进行增殖,并维持肝细胞的基本生物学特性.
為研究FoxA3和Hnf4α組閤對原代大鼠肝細胞體外增殖的作用,構建瞭FoxA3和Hnf4α基因的慢病毒載體,共轉染體外培養的原代大鼠肝細胞;倒置熒光顯微鏡下觀察轉染細胞是否增殖;反轉錄PCR(Reverse transcription PCR,RT-PCR)檢測外源基因和肝細胞特異基因的錶達情況;PAS (Periodic acidschiff)染色和吲哚菁綠(Indocyanine green,ICG)攝取檢測轉染細胞功能.結果錶明,慢病毒轉染4d後錶達綠色熒光蛋白的部分肝細胞呈現上皮樣形態併增殖成簇,與正常培養的肝細胞相比增殖能力明顯增彊;PCR分析錶明增殖的肝細胞除錶達外源FoxA3和Hnf4α外,還錶達肝細胞的標誌基因Alb、CK18和G6p;功能檢測結果錶明增殖的肝細胞具有成熟肝細胞糖原閤成和吲哚菁綠攝取的能力.以上結果錶明,FoxA3和Hf4α能促使體外培養的原代大鼠肝細胞進行增殖,併維持肝細胞的基本生物學特性.
위연구FoxA3화Hnf4α조합대원대대서간세포체외증식적작용,구건료FoxA3화Hnf4α기인적만병독재체,공전염체외배양적원대대서간세포;도치형광현미경하관찰전염세포시부증식;반전록PCR(Reverse transcription PCR,RT-PCR)검측외원기인화간세포특이기인적표체정황;PAS (Periodic acidschiff)염색화신타정록(Indocyanine green,ICG)섭취검측전염세포공능.결과표명,만병독전염4d후표체록색형광단백적부분간세포정현상피양형태병증식성족,여정상배양적간세포상비증식능력명현증강;PCR분석표명증식적간세포제표체외원FoxA3화Hnf4α외,환표체간세포적표지기인Alb、CK18화G6p;공능검측결과표명증식적간세포구유성숙간세포당원합성화신타정록섭취적능력.이상결과표명,FoxA3화Hf4α능촉사체외배양적원대대서간세포진행증식,병유지간세포적기본생물학특성.
