食品与生物技术学报
食品與生物技術學報
식품여생물기술학보
JOURNAL OF FOOD SCIENCE AND BIOTECHNOLOGY
2015年
5期
554-559
,共6页
韦素真%张会%姚杨%岳苗苗%李杰
韋素真%張會%姚楊%嶽苗苗%李傑
위소진%장회%요양%악묘묘%리걸
天门冬酰胺酶%黑曲霉%基因置换%Berthelot显色反应
天門鼕酰胺酶%黑麯黴%基因置換%Berthelot顯色反應
천문동선알매%흑곡매%기인치환%Berthelot현색반응
asparaginase%Aspergillus niger%gene replacement%berthelot colour reaction
根据NCBI中的黑曲霉天门冬酰胺酶基因asp序列(GI∶ 145231287)设计特异性引物,从黑曲霉CICC2462基因组中扩增asp基因编码区,构建其黑曲霉表达载体pSZHG-Asp.通过农杆菌介导法转化黑曲霉,筛选以asp基因置换糖化酶基因glaA的同源重组转化子.对转化子的表达产物进行SDS-PAGE分析和酶活检测.获得8株在glaA位点发生基因置换的同源重组转化子,并对其中4株的上清液进行检测.SDS-PAGE结果显示,在42 000处有目的蛋白质条带,重组菌株的目的蛋白质表达量为185～417 μg/mL,发酵液最高酶活为21 111 U/mL.
根據NCBI中的黑麯黴天門鼕酰胺酶基因asp序列(GI∶ 145231287)設計特異性引物,從黑麯黴CICC2462基因組中擴增asp基因編碼區,構建其黑麯黴錶達載體pSZHG-Asp.通過農桿菌介導法轉化黑麯黴,篩選以asp基因置換糖化酶基因glaA的同源重組轉化子.對轉化子的錶達產物進行SDS-PAGE分析和酶活檢測.穫得8株在glaA位點髮生基因置換的同源重組轉化子,併對其中4株的上清液進行檢測.SDS-PAGE結果顯示,在42 000處有目的蛋白質條帶,重組菌株的目的蛋白質錶達量為185～417 μg/mL,髮酵液最高酶活為21 111 U/mL.
근거NCBI중적흑곡매천문동선알매기인asp서렬(GI∶ 145231287)설계특이성인물,종흑곡매CICC2462기인조중확증asp기인편마구,구건기흑곡매표체재체pSZHG-Asp.통과농간균개도법전화흑곡매,사선이asp기인치환당화매기인glaA적동원중조전화자.대전화자적표체산물진행SDS-PAGE분석화매활검측.획득8주재glaA위점발생기인치환적동원중조전화자,병대기중4주적상청액진행검측.SDS-PAGE결과현시,재42 000처유목적단백질조대,중조균주적목적단백질표체량위185～417 μg/mL,발효액최고매활위21 111 U/mL.
