皖南医学院学报
皖南醫學院學報
환남의학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE WANNAN
2015年
3期
209-213
,共5页
胡敏%王亚东%黄顺%钱琛
鬍敏%王亞東%黃順%錢琛
호민%왕아동%황순%전침
腹腔巨噬细胞%肿瘤坏死因子-α%血吸虫可溶性虫卵抗原%增殖%胶原合成
腹腔巨噬細胞%腫瘤壞死因子-α%血吸蟲可溶性蟲卵抗原%增殖%膠原閤成
복강거서세포%종류배사인자-α%혈흡충가용성충란항원%증식%효원합성
peritoneal macrophage%tumor necrosis factor-α%soluble egg antigen%proliferation%collagen synthesis
目的：观察日本血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）对体外培养的大鼠腹腔巨噬细胞（PMCs）中TNF-α活化及表达的影响。方法：体外培养大鼠PMCs，利用苏木素-伊红染色（ HE染色）、免疫细胞化学染色（ IHC）、RT-PCR以及放免法，对SEA作用后的大鼠PMCs形态变化和TNF-α表达进行观察；同时，制备SEA活化腹腔巨噬细胞条件培养基（ SEA-MCM），利用MTT比色法和3H-脯氨酸掺入法，对经过SEA-MCM作用后的HSC-T6细胞增殖及胶原合成结果进行检测。结果：①大鼠PMCs在LPS（10 mg／L）和SEA（10 mg／L）分别作用3 h、6 h和9 h后，可以使PMCs活化增加，并促进大鼠PMCs TNF-α蛋白表达（ P＜0．05）；②LPS（10 mg／L）和SEA（10 mg／L）分别作用6 h，大鼠PMCs TNF-αmRNA表达增加（ P＜0．05）；③LPS（10 mg／L）和SEA（10 mg／L）分别作用3 h、6 h和9 h，培养上清中TNF-α含量高于阴性对照组（P＜0．05）；6 h和9 h组均高于3 h组（P＜0．05），6 h和9 h组间无明显差别（P＞0．05）；④SEA-MCM促进HSC-T6细胞增殖和胶原合成（P＜0．05）。结论：体外实验证实SEA与LPS在活化大鼠PMCs、促进TNF-α表达和分泌中有相似的作用，这可能与SEA活化大鼠PMCs能明显促进HSC-T6细胞增殖和胶原合成有关。
目的：觀察日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原（SEA）對體外培養的大鼠腹腔巨噬細胞（PMCs）中TNF-α活化及錶達的影響。方法：體外培養大鼠PMCs，利用囌木素-伊紅染色（ HE染色）、免疫細胞化學染色（ IHC）、RT-PCR以及放免法，對SEA作用後的大鼠PMCs形態變化和TNF-α錶達進行觀察；同時，製備SEA活化腹腔巨噬細胞條件培養基（ SEA-MCM），利用MTT比色法和3H-脯氨痠摻入法，對經過SEA-MCM作用後的HSC-T6細胞增殖及膠原閤成結果進行檢測。結果：①大鼠PMCs在LPS（10 mg／L）和SEA（10 mg／L）分彆作用3 h、6 h和9 h後，可以使PMCs活化增加，併促進大鼠PMCs TNF-α蛋白錶達（ P＜0．05）；②LPS（10 mg／L）和SEA（10 mg／L）分彆作用6 h，大鼠PMCs TNF-αmRNA錶達增加（ P＜0．05）；③LPS（10 mg／L）和SEA（10 mg／L）分彆作用3 h、6 h和9 h，培養上清中TNF-α含量高于陰性對照組（P＜0．05）；6 h和9 h組均高于3 h組（P＜0．05），6 h和9 h組間無明顯差彆（P＞0．05）；④SEA-MCM促進HSC-T6細胞增殖和膠原閤成（P＜0．05）。結論：體外實驗證實SEA與LPS在活化大鼠PMCs、促進TNF-α錶達和分泌中有相似的作用，這可能與SEA活化大鼠PMCs能明顯促進HSC-T6細胞增殖和膠原閤成有關。
목적：관찰일본혈흡충가용성충란항원（SEA）대체외배양적대서복강거서세포（PMCs）중TNF-α활화급표체적영향。방법：체외배양대서PMCs，이용소목소-이홍염색（ HE염색）、면역세포화학염색（ IHC）、RT-PCR이급방면법，대SEA작용후적대서PMCs형태변화화TNF-α표체진행관찰；동시，제비SEA활화복강거서세포조건배양기（ SEA-MCM），이용MTT비색법화3H-포안산참입법，대경과SEA-MCM작용후적HSC-T6세포증식급효원합성결과진행검측。결과：①대서PMCs재LPS（10 mg／L）화SEA（10 mg／L）분별작용3 h、6 h화9 h후，가이사PMCs활화증가，병촉진대서PMCs TNF-α단백표체（ P＜0．05）；②LPS（10 mg／L）화SEA（10 mg／L）분별작용6 h，대서PMCs TNF-αmRNA표체증가（ P＜0．05）；③LPS（10 mg／L）화SEA（10 mg／L）분별작용3 h、6 h화9 h，배양상청중TNF-α함량고우음성대조조（P＜0．05）；6 h화9 h조균고우3 h조（P＜0．05），6 h화9 h조간무명현차별（P＞0．05）；④SEA-MCM촉진HSC-T6세포증식화효원합성（P＜0．05）。결론：체외실험증실SEA여LPS재활화대서PMCs、촉진TNF-α표체화분비중유상사적작용，저가능여SEA활화대서PMCs능명현촉진HSC-T6세포증식화효원합성유관。
Objective:To observe the effect of soluble egg antigen(SEA) on TNF-αexpression in rat peritoneal macrophages in vitro and proliferation and collagen synthesis of HSC-T6 cells.Methods:Rat peritoneal macrophages were harvested via irrigation of the peritoneal cavity,and cultured in vitro.The effect of SEA on the expression of TNF-αin the rat peritoneal macrophages was observed after staining of the cells with HE and immunocytochemistry ,RT-PCR and radiommunity.SEA-MCM was prepared,and MTT colorimetric assay and 3H-proline incorporation were performed to detect the proliferation and collagen synthesis of HSC-T6.Results:①At 3,6 and 9h,the expression of TNF-αin the SEA and LPS group was significantly higher than that in the con-trol treated with RPMI1640(P<0.05);②The level of TNF-αin the supernatant was also significantly higher than that in the control treated RPMI1640 (P<0.05);③After exposure to SEA or LPS for 3,6 and 9 h,the expression of TNF-αmRNA of peritoneal macrophages in the SEA and LPS group was significantly higher than that in the control after treatment with RPMI1640(P<0.05);④SEA-MCM significantly promoted the proliferation and collagen production of HSC-T6 cells (P<0.05).Conclusion:SEA,functioning similarly with LPS,may have the effect to induce rat peritoneal macrophages activa-tion and promote expression and secretion of TNF-α,which is possibly related to the capacity of SEA that is capable of promoting the proliferation and col-lagen production of HSC-T6 in vitro.
