重庆医学
重慶醫學
중경의학
CHONGQING MEDICAL JOURNAL
2015年
16期
2167-2169,2173
,共4页
秦川%陈林%肖颖彬
秦川%陳林%肖穎彬
진천%진림%초영빈
促红细胞生成素%线粒体生物合成%慢性缺氧%心肌细胞%内皮型一氧化氮合酶
促紅細胞生成素%線粒體生物閤成%慢性缺氧%心肌細胞%內皮型一氧化氮閤酶
촉홍세포생성소%선립체생물합성%만성결양%심기세포%내피형일양화담합매
erythropoietin%mitochondrial biogenesis%chronic hypoxia%cardiomyocyte%endothelial nitric oxide synthase
目的：探讨内皮型一氧化氮合酶（eNOS）在促红细胞生成素（EPO）调节慢性缺氧环境中心肌细胞线粒体生物合成中的作用及其机制。方法采用H9c2心肌细胞，将其于缺氧环境下培养7 d （94％ N2，5％ O2），建立心肌细胞慢性缺氧模型。将心肌细胞根据不同处理分为缺氧对照组（HC），20 U／mL重组人 EPO（rhEPO）处理缺氧组（HE）和20 U／mL rhEPO＋ eNOS shRNA干扰处理缺氧组（HR）。以荧光探针检测线粒体数量变化；RT‐PCR检测线粒体DNA相对表达量；Western blot 检测eNOS总蛋白表达及磷酸化水平（p‐eNOS）变化。结果 rhEPO显著增强eNOS磷酸化水平，增加线粒体数量及其DNA相对拷贝数（P＜0．05）；而同时采用shRNA干扰eNOS后，HR组eNOS总蛋白表达及磷酸化水平较HE组降低（P＜0．05），同时线粒体数量及其DNA相对拷贝数较 HE组减少（P＜0．05）。结论 eNOS的磷酸化激活是EPO增强慢性缺氧心肌细胞线粒体生物合成的重要信号转导机制。
目的：探討內皮型一氧化氮閤酶（eNOS）在促紅細胞生成素（EPO）調節慢性缺氧環境中心肌細胞線粒體生物閤成中的作用及其機製。方法採用H9c2心肌細胞，將其于缺氧環境下培養7 d （94％ N2，5％ O2），建立心肌細胞慢性缺氧模型。將心肌細胞根據不同處理分為缺氧對照組（HC），20 U／mL重組人 EPO（rhEPO）處理缺氧組（HE）和20 U／mL rhEPO＋ eNOS shRNA榦擾處理缺氧組（HR）。以熒光探針檢測線粒體數量變化；RT‐PCR檢測線粒體DNA相對錶達量；Western blot 檢測eNOS總蛋白錶達及燐痠化水平（p‐eNOS）變化。結果 rhEPO顯著增彊eNOS燐痠化水平，增加線粒體數量及其DNA相對拷貝數（P＜0．05）；而同時採用shRNA榦擾eNOS後，HR組eNOS總蛋白錶達及燐痠化水平較HE組降低（P＜0．05），同時線粒體數量及其DNA相對拷貝數較 HE組減少（P＜0．05）。結論 eNOS的燐痠化激活是EPO增彊慢性缺氧心肌細胞線粒體生物閤成的重要信號轉導機製。
목적：탐토내피형일양화담합매（eNOS）재촉홍세포생성소（EPO）조절만성결양배경중심기세포선립체생물합성중적작용급기궤제。방법채용H9c2심기세포，장기우결양배경하배양7 d （94％ N2，5％ O2），건립심기세포만성결양모형。장심기세포근거불동처리분위결양대조조（HC），20 U／mL중조인 EPO（rhEPO）처리결양조（HE）화20 U／mL rhEPO＋ eNOS shRNA간우처리결양조（HR）。이형광탐침검측선립체수량변화；RT‐PCR검측선립체DNA상대표체량；Western blot 검측eNOS총단백표체급린산화수평（p‐eNOS）변화。결과 rhEPO현저증강eNOS린산화수평，증가선립체수량급기DNA상대고패수（P＜0．05）；이동시채용shRNA간우eNOS후，HR조eNOS총단백표체급린산화수평교HE조강저（P＜0．05），동시선립체수량급기DNA상대고패수교 HE조감소（P＜0．05）。결론 eNOS적린산화격활시EPO증강만성결양심기세포선립체생물합성적중요신호전도궤제。
Objective To explore the role of endothelial nitric oxide synthase(eNOS) in the regulatory effects of erythropoie‐tin (EPO) on mitochondiral biogenesis in cardiomyocytes exposed to chronic hypoxia .Methods H9c2 cardiomyocytes were cultured in the environment of hypoxia for 1 week(94% N2 ,5% O2 ) ,establishing the chronic hypoxic cardiomyocyte model .All the cells were divided into 3 groups :HC(chronic hypoxic control) ,HE[treated with chronic hypoxia and 20 U/mL recombinant human EPO (rhEPO) ]and HR(cells transfected with eNOS shRNA plasmid and treated with 20 U/mL rhEPO and chronic hypoxia) .Fluores‐cent probe was used to detect the changes of mitochondial number .Mitochondial DNA (mtDNA) relative express level was assayed by RT‐PCR .The expression and phosphorylation of eNOS protein were analyzed with Western blot .Results rhEPO significantly increased the phosphorylation of eNOS and elavated the mitochondialt number and mtDNA (P< 0 .05) .shRNA interference on eNOS significantly blocked all the above changes induced by rhEPO (P<0 .05) .Conclusion Phosphory lation of eNOS is the im‐portant signalling pathway for the enhanced mitochondrial biogenesis in cardiomyocytes exposed to chronic hypoxia by EPO .
