CAJ | 학술논문

目的：将人转铁蛋白受体（hTfR）基因克隆到慢病毒表达载体pLENTI6．3，鉴定其正确性，体外感染小鼠神经干细胞并检测其表达，为活体神经干细胞（NSCs）MR分子成像提供实验基础。方法利用聚合酶链反应技术（PCR）扩增hT‐fR基因，并克隆到pLENTI6.3载体；通过菌落PCR初步筛选、BamH1酶切鉴定和测序鉴定构建的pLENTI6．3‐hTfR‐IRES‐EGFP重组载体，利用Lipofectin2000试剂将PLP1、PLP2、PLP‐VSVG和pLenti6.3‐hTfR‐IRES‐EGFP共转染293T细胞进行慢病毒包装，48 h后收集病毒上清。体外感染NSCs ，Western bolt检测hTfR的表达。结果成功构建了hTfR基因慢病毒表达载体，包装的慢病毒颗粒成功感染NSCs ，Western bolt鉴定hTfR在NSCs过表达。结论 pLENTI6.3‐hTfR‐IRES‐EG‐FP慢病毒表达载体构建成功，并建立其慢病毒表达系统，为下一步进行活体干细胞M R分子成像实验研究奠定基础。
목적：장인전철단백수체（hTfR）기인극륭도만병독표체재체pLENTI6．3，감정기정학성，체외감염소서신경간세포병검측기표체，위활체신경간세포（NSCs）MR분자성상제공실험기출。방법이용취합매련반응기술（PCR）확증hT‐fR기인，병극륭도pLENTI6.3재체；통과균락PCR초보사선、BamH1매절감정화측서감정구건적pLENTI6．3‐hTfR‐IRES‐EGFP중조재체，이용Lipofectin2000시제장PLP1、PLP2、PLP‐VSVG화pLenti6.3‐hTfR‐IRES‐EGFP공전염293T세포진행만병독포장，48 h후수집병독상청。체외감염NSCs ，Western bolt검측hTfR적표체。결과성공구건료hTfR기인만병독표체재체，포장적만병독과립성공감염NSCs ，Western bolt감정hTfR재NSCs과표체。결론 pLENTI6.3‐hTfR‐IRES‐EG‐FP만병독표체재체구건성공，병건립기만병독표체계통，위하일보진행활체간세포M R분자성상실험연구전정기출。