中华诊断学电子杂志
中華診斷學電子雜誌
중화진단학전자잡지
2015年
1期
1-5
,共5页
尹昆%赵桂华%寇景轩%李琛琛%黄炳成%魏庆宽%闫歌
尹昆%趙桂華%寇景軒%李琛琛%黃炳成%魏慶寬%閆歌
윤곤%조계화%구경헌%리침침%황병성%위경관%염가
C35基因%基因,肿瘤%原核表达纯化%乳腺肿瘤%诊断
C35基因%基因,腫瘤%原覈錶達純化%乳腺腫瘤%診斷
C35기인%기인,종류%원핵표체순화%유선종류%진단
目的 构建野生型和C112S突变型乳腺癌标志基因C35的原核表达载体,使其在原核细胞中高效表达、纯化并予以鉴定.方法 聚合酶链反应(PCR)法扩增野生型和突变型C35基因,将其分别插入原核表达载体pGLO1中,构建重组融合蛋白表达载体野生型pGLO1-C35和突变型pGLO 1-C35,转化大肠杆菌E.coli BL21,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导表达C35融合蛋白,并对诱导条件进行优化,通过镍离子螯合亲和层析柱纯化野生型和突变型C35融合蛋白,经蛋白质印迹法验证纯化的重组蛋白特异性.结果 成功构建了野生型和突变型C35基因的原核表达质粒,并将两种C35融合蛋白成功表达,最佳诱导表达条件为37℃,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导6h,经纯化后获得高纯度的特异性重组蛋白,浓度达约1.5 mg/mL.结论 在原核表达系统中成功表达、纯化了野生型和突变型C35融合蛋白,为进一步制备基于C35抗血清的乳腺癌早期筛查试剂盒奠定了基础.
目的 構建野生型和C112S突變型乳腺癌標誌基因C35的原覈錶達載體,使其在原覈細胞中高效錶達、純化併予以鑒定.方法 聚閤酶鏈反應(PCR)法擴增野生型和突變型C35基因,將其分彆插入原覈錶達載體pGLO1中,構建重組融閤蛋白錶達載體野生型pGLO1-C35和突變型pGLO 1-C35,轉化大腸桿菌E.coli BL21,經異丙基硫代-β-D-半乳糖苷誘導錶達C35融閤蛋白,併對誘導條件進行優化,通過鎳離子螯閤親和層析柱純化野生型和突變型C35融閤蛋白,經蛋白質印跡法驗證純化的重組蛋白特異性.結果 成功構建瞭野生型和突變型C35基因的原覈錶達質粒,併將兩種C35融閤蛋白成功錶達,最佳誘導錶達條件為37℃,異丙基-β-D-硫代半乳糖苷誘導6h,經純化後穫得高純度的特異性重組蛋白,濃度達約1.5 mg/mL.結論 在原覈錶達繫統中成功錶達、純化瞭野生型和突變型C35融閤蛋白,為進一步製備基于C35抗血清的乳腺癌早期篩查試劑盒奠定瞭基礎.
목적 구건야생형화C112S돌변형유선암표지기인C35적원핵표체재체,사기재원핵세포중고효표체、순화병여이감정.방법 취합매련반응(PCR)법확증야생형화돌변형C35기인,장기분별삽입원핵표체재체pGLO1중,구건중조융합단백표체재체야생형pGLO1-C35화돌변형pGLO 1-C35,전화대장간균E.coli BL21,경이병기류대-β-D-반유당감유도표체C35융합단백,병대유도조건진행우화,통과얼리자오합친화층석주순화야생형화돌변형C35융합단백,경단백질인적법험증순화적중조단백특이성.결과 성공구건료야생형화돌변형C35기인적원핵표체질립,병장량충C35융합단백성공표체,최가유도표체조건위37℃,이병기-β-D-류대반유당감유도6h,경순화후획득고순도적특이성중조단백,농도체약1.5 mg/mL.결론 재원핵표체계통중성공표체、순화료야생형화돌변형C35융합단백,위진일보제비기우C35항혈청적유선암조기사사시제합전정료기출.
