中国家禽
中國傢禽
중국가금
CHINA POULTRY
2015年
11期
23-26
,共4页
李拓凡%多婷%梁雄燕%顾玉芳%杨玉莹
李拓凡%多婷%樑雄燕%顧玉芳%楊玉瑩
리탁범%다정%량웅연%고옥방%양옥형
ALV-J%env基因%EGFP%融合表达
ALV-J%env基因%EGFP%融閤錶達
ALV-J%env기인%EGFP%융합표체
为获得具备良好抗原性和生物活性的J亚群禽白血病病毒(AL V-J)env基因主要功能区的表达产物,采用特异性引物分别从保存的pMD 18T-envHB2010质粒、PIRES2-EGFP中扩增ALV-J env基因主要功能区和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因,酶切、连接后插入pFastBac Daul载体,构建杆状病毒转移载体pFastBac Daul-env-EGFP,将其转化DH 10Bac感受态细胞制备重组杆粒Bacmid-env-EGFP,转染Sf9细胞进行真核表达.结果显示,转染了重组杆粒的Sf9细胞在倒置荧光显微镜下呈现亮绿荧光;以ALV-J单克隆抗体JE9进行Western blot检测,转染重组杆粒的Sf9细胞检测出约85 ku的条带.结果表明,目的基因在Sf9细胞中得到了良好的表达,为进一步研究ALV-J提供基础试验材料.
為穫得具備良好抗原性和生物活性的J亞群禽白血病病毒(AL V-J)env基因主要功能區的錶達產物,採用特異性引物分彆從保存的pMD 18T-envHB2010質粒、PIRES2-EGFP中擴增ALV-J env基因主要功能區和增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)基因,酶切、連接後插入pFastBac Daul載體,構建桿狀病毒轉移載體pFastBac Daul-env-EGFP,將其轉化DH 10Bac感受態細胞製備重組桿粒Bacmid-env-EGFP,轉染Sf9細胞進行真覈錶達.結果顯示,轉染瞭重組桿粒的Sf9細胞在倒置熒光顯微鏡下呈現亮綠熒光;以ALV-J單剋隆抗體JE9進行Western blot檢測,轉染重組桿粒的Sf9細胞檢測齣約85 ku的條帶.結果錶明,目的基因在Sf9細胞中得到瞭良好的錶達,為進一步研究ALV-J提供基礎試驗材料.
위획득구비량호항원성화생물활성적J아군금백혈병병독(AL V-J)env기인주요공능구적표체산물,채용특이성인물분별종보존적pMD 18T-envHB2010질립、PIRES2-EGFP중확증ALV-J env기인주요공능구화증강형록색형광단백(EGFP)기인,매절、련접후삽입pFastBac Daul재체,구건간상병독전이재체pFastBac Daul-env-EGFP,장기전화DH 10Bac감수태세포제비중조간립Bacmid-env-EGFP,전염Sf9세포진행진핵표체.결과현시,전염료중조간립적Sf9세포재도치형광현미경하정현량록형광;이ALV-J단극륭항체JE9진행Western blot검측,전염중조간립적Sf9세포검측출약85 ku적조대.결과표명,목적기인재Sf9세포중득도료량호적표체,위진일보연구ALV-J제공기출시험재료.
