肾脏病与透析肾移植杂志
腎髒病與透析腎移植雜誌
신장병여투석신이식잡지
CHINESE JOURNAL OF NEPHROLOGY,DIALYSIS & TRANSPLANTATION
2015年
3期
242-248
,共7页
庾楠楠%李华%李军%肖争%向玉琼%赵祝叶%尤燕华%刘虹%孙林
庾楠楠%李華%李軍%肖爭%嚮玉瓊%趙祝葉%尤燕華%劉虹%孫林
유남남%리화%리군%초쟁%향옥경%조축협%우연화%류홍%손림
蛋白磷酸酶2Ac%去磷酸化%细胞外基质合成%EMT%Smad3中间连接区
蛋白燐痠酶2Ac%去燐痠化%細胞外基質閤成%EMT%Smad3中間連接區
단백린산매2Ac%거린산화%세포외기질합성%EMT%Smad3중간련접구
protein phosphatase 2Ac%accumulation of extracellular matrix%dephosphorylation%epithelial-mesenchymal transition (EMT)%Smad3 link region
目的:通过蛋白磷酸酶2Ac(PP2Ac)过表达和小干扰RNA质粒转染人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)后予以转化生长因子β1(TGF-β1)刺激,观察PP2Ac对细胞外基质合成、肾小管上皮细胞间充质转分化(EMT)和Smad3中间连接区磷酸化的影响,探讨PP2Ac促肾间质纤维化的机制. 方法:常规培养HK-2细胞,分为对照组、TGF-β1组和质粒转染+TGF-β1组.采用RT-PCR和Western Blot法检测PP2Ac、纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E选择素(E-cadherin)表达水平.采用Western blot法检测Smad3、Smad3中间连接区pSmad3-L(pSer204)和pSmad3-L(pSer208)表达情况. 结果:RT-PCR和Western Blot结果均显示:PP2Ac过表达质粒转染HK-2细胞再予TGF-β1刺激24h后,PP2Ac表达较TGF-β1组升高,同时FN、CoM和a-SMA表达明显上调,E-cadherin表达下调;而PP2Ac小干扰RNA转染HK-2细胞后再予TGF-β1刺激24h,较TGF-β1组,PP2Ac表达降低,FN、Col-Ⅰ和α-SMA表达减少,E-cadherin表达增高(P＜0.05).Western Blot结果显示:TGF-β1刺激HK-2细胞1h时PP2Ac和Smad3中间区磷酸化的蛋白表达均达到峰值;HK-2细胞转染PP2Ac过表达质粒再予TGF-β1刺激1h后,与单纯TGF-β1刺激组比较,核蛋白中pSmad3-L(pSer204)和pSmad3-L(pSer208)表达均下降;而PP2Ac小干扰RNA转染HK-2细胞再予TGF-β1刺激1h后,核蛋白中pSmad3-L(pSer204)和pSmad3-L(pSer208)蛋白表达均增加(P＜0.05). 结论:PP2Ac促进肾小管上皮细胞外基质的生成及EMT;PP2Ac介导肾小管上皮细胞Smad3中间连接区去磷酸化.
目的:通過蛋白燐痠酶2Ac(PP2Ac)過錶達和小榦擾RNA質粒轉染人腎小管上皮細胞(HK-2細胞)後予以轉化生長因子β1(TGF-β1)刺激,觀察PP2Ac對細胞外基質閤成、腎小管上皮細胞間充質轉分化(EMT)和Smad3中間連接區燐痠化的影響,探討PP2Ac促腎間質纖維化的機製. 方法:常規培養HK-2細胞,分為對照組、TGF-β1組和質粒轉染+TGF-β1組.採用RT-PCR和Western Blot法檢測PP2Ac、纖維連接蛋白(FN)、Ⅰ型膠原(Col-Ⅰ)、α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)和E選擇素(E-cadherin)錶達水平.採用Western blot法檢測Smad3、Smad3中間連接區pSmad3-L(pSer204)和pSmad3-L(pSer208)錶達情況. 結果:RT-PCR和Western Blot結果均顯示:PP2Ac過錶達質粒轉染HK-2細胞再予TGF-β1刺激24h後,PP2Ac錶達較TGF-β1組升高,同時FN、CoM和a-SMA錶達明顯上調,E-cadherin錶達下調;而PP2Ac小榦擾RNA轉染HK-2細胞後再予TGF-β1刺激24h,較TGF-β1組,PP2Ac錶達降低,FN、Col-Ⅰ和α-SMA錶達減少,E-cadherin錶達增高(P＜0.05).Western Blot結果顯示:TGF-β1刺激HK-2細胞1h時PP2Ac和Smad3中間區燐痠化的蛋白錶達均達到峰值;HK-2細胞轉染PP2Ac過錶達質粒再予TGF-β1刺激1h後,與單純TGF-β1刺激組比較,覈蛋白中pSmad3-L(pSer204)和pSmad3-L(pSer208)錶達均下降;而PP2Ac小榦擾RNA轉染HK-2細胞再予TGF-β1刺激1h後,覈蛋白中pSmad3-L(pSer204)和pSmad3-L(pSer208)蛋白錶達均增加(P＜0.05). 結論:PP2Ac促進腎小管上皮細胞外基質的生成及EMT;PP2Ac介導腎小管上皮細胞Smad3中間連接區去燐痠化.
목적:통과단백린산매2Ac(PP2Ac)과표체화소간우RNA질립전염인신소관상피세포(HK-2세포)후여이전화생장인자β1(TGF-β1)자격,관찰PP2Ac대세포외기질합성、신소관상피세포간충질전분화(EMT)화Smad3중간련접구린산화적영향,탐토PP2Ac촉신간질섬유화적궤제. 방법:상규배양HK-2세포,분위대조조、TGF-β1조화질립전염+TGF-β1조.채용RT-PCR화Western Blot법검측PP2Ac、섬유련접단백(FN)、Ⅰ형효원(Col-Ⅰ)、α평활기기동단백(α-SMA)화E선택소(E-cadherin)표체수평.채용Western blot법검측Smad3、Smad3중간련접구pSmad3-L(pSer204)화pSmad3-L(pSer208)표체정황. 결과:RT-PCR화Western Blot결과균현시:PP2Ac과표체질립전염HK-2세포재여TGF-β1자격24h후,PP2Ac표체교TGF-β1조승고,동시FN、CoM화a-SMA표체명현상조,E-cadherin표체하조;이PP2Ac소간우RNA전염HK-2세포후재여TGF-β1자격24h,교TGF-β1조,PP2Ac표체강저,FN、Col-Ⅰ화α-SMA표체감소,E-cadherin표체증고(P＜0.05).Western Blot결과현시:TGF-β1자격HK-2세포1h시PP2Ac화Smad3중간구린산화적단백표체균체도봉치;HK-2세포전염PP2Ac과표체질립재여TGF-β1자격1h후,여단순TGF-β1자격조비교,핵단백중pSmad3-L(pSer204)화pSmad3-L(pSer208)표체균하강;이PP2Ac소간우RNA전염HK-2세포재여TGF-β1자격1h후,핵단백중pSmad3-L(pSer204)화pSmad3-L(pSer208)단백표체균증가(P＜0.05). 결론:PP2Ac촉진신소관상피세포외기질적생성급EMT;PP2Ac개도신소관상피세포Smad3중간련접구거린산화.
