生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2015年
3期
346-348
,共3页
肠出血性大肠杆菌O157∶H7%Ⅲ型分泌系统%Red重组系统
腸齣血性大腸桿菌O157∶H7%Ⅲ型分泌繫統%Red重組繫統
장출혈성대장간균O157∶H7%Ⅲ형분비계통%Red중조계통
λRed recombinant system%enterohemorrhagic E.coli O157∶H7%typeⅢ secretion
目的:利用λ噬菌体的Red重组系统敲除肠出血性大肠杆菌O157∶H7的Ⅲ型分泌系统ATP水解酶EscN,构建大肠杆菌escN基因缺失突变株.方法:以O157∶H7为模板,PCR扩增目的基因两侧的同源臂序列,分别酶切连接于pUC19-kan质粒上,PCR获得中间嵌合卡那霉素抗性基因(带有FRT位点)的同源线性片段,利用质粒pKD46和pCP20介导的重组技术敲除escN基因,并去除抗性标记;PCR及测序验证目的基因缺失后,测定缺失株及野生菌株的生长曲线.结果:敲除了肠出血性大肠杆菌O157∶H7的escN基因,突变株与野生株的生长曲线相近.结论:构建了Ⅲ型分泌系统缺陷菌株,为进一步研究Ⅲ型分泌系统因子在肠出血性大肠杆菌致病过程中的作用奠定了基础.
目的:利用λ噬菌體的Red重組繫統敲除腸齣血性大腸桿菌O157∶H7的Ⅲ型分泌繫統ATP水解酶EscN,構建大腸桿菌escN基因缺失突變株.方法:以O157∶H7為模闆,PCR擴增目的基因兩側的同源臂序列,分彆酶切連接于pUC19-kan質粒上,PCR穫得中間嵌閤卡那黴素抗性基因(帶有FRT位點)的同源線性片段,利用質粒pKD46和pCP20介導的重組技術敲除escN基因,併去除抗性標記;PCR及測序驗證目的基因缺失後,測定缺失株及野生菌株的生長麯線.結果:敲除瞭腸齣血性大腸桿菌O157∶H7的escN基因,突變株與野生株的生長麯線相近.結論:構建瞭Ⅲ型分泌繫統缺陷菌株,為進一步研究Ⅲ型分泌繫統因子在腸齣血性大腸桿菌緻病過程中的作用奠定瞭基礎.
목적:이용λ서균체적Red중조계통고제장출혈성대장간균O157∶H7적Ⅲ형분비계통ATP수해매EscN,구건대장간균escN기인결실돌변주.방법:이O157∶H7위모판,PCR확증목적기인량측적동원비서렬,분별매절련접우pUC19-kan질립상,PCR획득중간감합잡나매소항성기인(대유FRT위점)적동원선성편단,이용질립pKD46화pCP20개도적중조기술고제escN기인,병거제항성표기;PCR급측서험증목적기인결실후,측정결실주급야생균주적생장곡선.결과:고제료장출혈성대장간균O157∶H7적escN기인,돌변주여야생주적생장곡선상근.결론:구건료Ⅲ형분비계통결함균주,위진일보연구Ⅲ형분비계통인자재장출혈성대장간균치병과정중적작용전정료기출.
