生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2015年
3期
334-337
,共4页
田钰茜%张阔%郝强%李维娜%张存%张英起%张伟
田鈺茜%張闊%郝彊%李維娜%張存%張英起%張偉
전옥천%장활%학강%리유나%장존%장영기%장위
人生长分化因子15%融合蛋白%基因工程%表达纯化%多克隆抗体
人生長分化因子15%融閤蛋白%基因工程%錶達純化%多剋隆抗體
인생장분화인자15%융합단백%기인공정%표체순화%다극륭항체
growth differentiation factor-15%fusion protein%genetic engineering%expression and purication%polyclonal antibody
目的:原核表达并纯化、鉴定人生长分化因子15(GDF-15),制备其多克隆抗体.方法:从人结肠癌细胞系HT29的cDNA扩增出GDF-15基因片段并插入pET-32a(+)原核表达载体,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达重组GDF-15,用镍亲和柱纯化,SDS-PAGE、Western印迹鉴定重组蛋白.用纯化的重组GDF-15免疫BALB&小鼠制备多克隆抗体,鉴定并检测其效价.结果:制备了pET-32a(+)-GDF-15表达载体;经IPTG诱导重组蛋白表达后,采用Ni亲和柱纯化蛋白,并经SDS-PAGE和免疫印迹鉴定;免疫BALB/c小鼠后获得了GDF-15多克隆抗体,ELISA检测抗体效价为1:100 000,并应用于肿瘤细胞的GDF-15检测中.结论:用基因工程和免疫学方法制备了重组人GDF-15及其多克隆抗体,为后续的分子机制和靶向治疗研究奠定了基础.
目的:原覈錶達併純化、鑒定人生長分化因子15(GDF-15),製備其多剋隆抗體.方法:從人結腸癌細胞繫HT29的cDNA擴增齣GDF-15基因片段併插入pET-32a(+)原覈錶達載體,轉化大腸桿菌BL21,IPTG誘導錶達重組GDF-15,用鎳親和柱純化,SDS-PAGE、Western印跡鑒定重組蛋白.用純化的重組GDF-15免疫BALB&小鼠製備多剋隆抗體,鑒定併檢測其效價.結果:製備瞭pET-32a(+)-GDF-15錶達載體;經IPTG誘導重組蛋白錶達後,採用Ni親和柱純化蛋白,併經SDS-PAGE和免疫印跡鑒定;免疫BALB/c小鼠後穫得瞭GDF-15多剋隆抗體,ELISA檢測抗體效價為1:100 000,併應用于腫瘤細胞的GDF-15檢測中.結論:用基因工程和免疫學方法製備瞭重組人GDF-15及其多剋隆抗體,為後續的分子機製和靶嚮治療研究奠定瞭基礎.
목적:원핵표체병순화、감정인생장분화인자15(GDF-15),제비기다극륭항체.방법:종인결장암세포계HT29적cDNA확증출GDF-15기인편단병삽입pET-32a(+)원핵표체재체,전화대장간균BL21,IPTG유도표체중조GDF-15,용얼친화주순화,SDS-PAGE、Western인적감정중조단백.용순화적중조GDF-15면역BALB&소서제비다극륭항체,감정병검측기효개.결과:제비료pET-32a(+)-GDF-15표체재체;경IPTG유도중조단백표체후,채용Ni친화주순화단백,병경SDS-PAGE화면역인적감정;면역BALB/c소서후획득료GDF-15다극륭항체,ELISA검측항체효개위1:100 000,병응용우종류세포적GDF-15검측중.결론:용기인공정화면역학방법제비료중조인GDF-15급기다극륭항체,위후속적분자궤제화파향치료연구전정료기출.
